周 慧，韩 翰, 周伟强

(沈阳医学院 1. 组织学与胚胎学教研室、2. 生物化学与分子生物学教研室、3. 病原生物学教研室，辽宁 沈阳 110034)

癌症被认为是世界上每个国家的主要死亡原因和延长预期寿命的重要障碍，据我国肿瘤登记中心的数据资料显示，乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在近十几年呈现上升趋势，居于城乡女性第一位[1]。辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid，SAHA)是一种二代组蛋白去乙酰化酶抑制剂，通过对细胞的核小体中的组蛋白乙酰化水平的调节，从而改变细胞染色质的结构，起到调节细胞转录因子的表达、细胞凋亡及细胞的诱导分化等相关的生理生化效应[2]。由334个氨基酸残基组成的人组织蛋白酶V (cathepsin V，CTSV)，分子量约为37 ku，是一种溶酶体蛋白水解酶，定位于9q22.2染色体[3]。但是，CTSV在自噬中的作用还未见深入了解。本文将SAHA作用于乳腺癌MCF-7细胞，研究CTSV在SAHA诱导乳腺癌MCF-7细胞自噬中的作用和机制，为进一步明确SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的分子作用机制，提供相应的理论基础和实验数据。

1 材料与方法

1.1 材料人乳腺癌细胞株MCF-7(ATCC细胞库)；RPMI 1640培养基(A4192301)、胎牛血清(A3160902)、青霉素及链霉素(KGY0023)(Thermo Scientific)；SAHA(1604-1)(Sigma-Aldrich)；Muse Count & Viability试剂盒(13-0618)(Millipore)；RNA提取试剂盒(1182866500)(Roche)；Power SYBR Green PCR Master mix(4367659)(Life Technologies)；抗体(Abcam Inc)；ECL化学发光试剂盒(B2162617)(Roche)；CTSV小干涉RNA( small interfering RNA，siRNA) (SC-44526-SH)(Santa Cruz)。

1.2 方法

1.2.1细胞培养 人乳腺癌MCF-7细胞使用含10 %胎牛血清的RPMI 1640培养基(添加100 U·mL-1青霉素和100 mg·L-1链霉素)，在含有5 % CO2的培养箱中37 ℃培养。实验时当细胞长至培养瓶底70%时，收集细胞调整浓度并接种到96孔板(1×107L-1)或6孔板(5×108L-1)。siRNA干扰实验需将已贴壁细胞更换为无血清培养基进行同步化处理后再进行实验。……