李 辰，王庆治，歧红阳，毛建娜，魏小娟，王鹏立，董志超

胆囊癌(gallbladder cancer, GBC)是胆道恶性肿瘤的一种，是全球发病率排名第五的胃肠道恶性肿瘤。早期GBC患者往往无症状，就诊时多为晚期。因此，需要一种新的肿瘤靶标，以提高GBC患者的诊断、预后判断和治疗。近年来，研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNAs)为基因表达的关键调控因子，在许多人类肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。快速发育生长因子同源蛋白4内含子转录本1(sprouty homolog 4 intronic transcript 1, SPRY4-IT1)为快速发育生长因子同源蛋白4(sprouty homolog 4, SPRY4)基因内的一个内含子，在各种癌症中被证明是癌症发生发展的调节枢纽。近期研究表明，lncRNA SPRY4-IT1的上调与乳腺癌、胃癌、肺癌、膀胱癌等肿瘤的进展及不良预后相关。此外，lncRNA SPRY4-IT1的下调可抑制胶质瘤的细胞增殖、细胞凋亡、转移和上皮-间质转化。然而，尚未见lncRNA SPRY4-IT1对GBC的影响及作用机制，该研究通过基因干扰lncRNAs SPRY4-IT1, 探究其对GBC细胞GBC-SD肿瘤干细胞样特性及线粒体膜电位变化的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

DMEM培养液、胎牛血清、胰酶、Lipofectamine 3000试剂(美国Invitrogen公司)；二喹啉甲酸 (bicinchoninic acid，BCA) 蛋白定量试剂盒(美国PIERCE公司)；Super RT cDNA试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司)；ELISA BrdU (比色) 试剂盒(瑞士罗氏公司)；Matrigel底膜基质(美国BD公司)；Sry相关HMG盒2(Sry-related HMG box 2, SOX2)、八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4, OCT4)、CD44、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Caspase-9、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2, associated X, Bax)、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2, Bcl-2)、c-Myc抗体(美国NEB公司)；辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的山羊抗小鼠二抗(美国Santa Cruz公司)；细胞凋亡检测试剂盒 (Annexin PE/7-AAD) (南京凯基生物有限公司)；高速低温离心机(美国Beckman公司)；CO培养箱(美国Thermo公司)；电泳槽、电转仪、ChemiDoc XRS 凝胶/发光图像分析仪(美国Bio-Rad公司)；电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂)；……