柳月霞，魏菊红，刘小丽

作者单位：南阳市第二人民医院产一科，河南 南阳473000

宫颈癌是临床常见恶性肿瘤之一，近年来，宫颈癌发病率逐年上升，已严重威胁女性身体健康，临床常采用化疗等方法治疗中晚期宫颈癌病人，但部分病人可产生化疗药物耐药性从而降低治疗效果。因而如何增强宫颈癌化疗敏感新成为热点研究问题。研究表明细胞自噬在宫颈癌发生及发展过程中发挥重要调控作用，还可参与化疗耐药性发生过程。长链编码RNA 膀胱癌相关转录本1（Long noncoding RNA bladder cancer-associated transcript 1，LncRNA BLACAT1）在非小细胞肺癌中呈高表达，沉默BLACAT1表达可抑制细胞增殖。但BLACAT1对宫颈癌细胞自噬及顺铂敏感性的影响尚未可知。生物信息学分析显示微小RNA-20b-5p（microRNA-20b-5p，miR-20b-5p）可能是BLACAT1下游的靶基因，研究表明miR-20b-5p在肺腺癌中呈低表达，并可抑制肿瘤细胞增殖。因此，本研究主要探讨BLACAT1、miR-20b-5p在宫颈癌细胞株与耐药细胞株中的表达，分析其对细胞自噬及顺铂敏感性的影响机制，以期为宫颈癌治疗药物的研发提供新方向。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人正常宫颈上皮细胞HUCEC、宫颈癌细胞株ME180、C-33A、Hela 购自美国ATCC公司；顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/DDP 购自广州吉妮欧生物；甲基噻唑基四唑（methylthiazolyl tetrazolium，MTT）购自上海泽叶生物；Lipofectamine2000 购自美国Invitrogen；Trizol、反转录及荧光定量试剂盒购自北京天根生化；BLACAT1 小分子干扰RNA（si-BLACAT1）及其阴性对照（si-NC）、miR-20b-5p 特异性寡核苷酸抑制剂（anti-miR-20b-5p）及其阴性对照（anti-miR-NC）、miR-20b-5p 寡核苷酸模拟物（miR-20b-5p mimics）及阴性对照mimic NC 序列（miRcon）购自上海吉玛；兔抗人p62、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LCB3-Ⅰ）、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LCB3-Ⅱ）抗体购自美国CST；二抗购自武汉博士德生物。……