马永红，同娟

作者单位：宝鸡市中心医院耳鼻喉科，陕西 宝鸡721000

鼻咽癌是一种发病率较高的常见头颈部肿瘤，其死亡率居于头颈部恶性肿瘤的前列。在我国，南方鼻咽癌的发病率高于北方，每年新增病人占全世界鼻咽癌新增病例的一半以上。鼻咽癌具有发病隐匿、转移性强等临床特点。目前，临床常采用放化疗结合治疗鼻咽癌，但由于病人的放化疗抵抗性极大限制了治疗效果，严重影响鼻咽癌病人的5年生存率。近年来，发现分子靶向治疗具有特异性强、副作用小等特点，成为临床探究鼻咽癌治疗的重点。近年来的研究证实，属于胶原蛋白家族的Ⅰ型胶原α1 链（COL1A1）基因在乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤组织中表达量显著增加，下调COL1A1抑制细胞的增殖，促进细胞的凋亡，表明在肿瘤的病理演进过程中其发挥促进作用。但COL1A1在鼻咽癌中的作用尚不十分清楚，因此2017年9月至2018年12月，本研究通过小干扰RNA（Small interference RNA）下调鼻咽癌细胞中COL1A1的表达量，研究其对鼻咽癌细胞生物学特性的影响，为鼻咽癌的临床治疗提供分子靶位点。

1 材料与方法

1.1 实验材料

鼻咽癌各细胞系（C666-1、CNE1、CNE2）以及人鼻咽上皮细胞（NP69）均购自北纳生物，DMEM培养基、胎牛血清、Lipofectamine 2000、RNA试剂提取试剂盒购自美国Thermo公司，反转录试剂盒、实时定量PCR（qPCR）购自美国Sigma公司，噻唑蓝（MTT）购自美国Bio Basic Inc公司；siRNA COL1A1以及阴性对照购自上海吉玛公司，COL1A1抗体、钙黏蛋白E（E-cadherin）抗体、波形蛋白（Vimentin）抗体、钙黏蛋白N（N-cadherin）抗体购自美国Sigma公司。酶标仪、qPCR仪购自美国Thermo公司。

1.2 细胞的培养

鼻咽癌各细胞系（C666-1、CNE1、CNE2）培养于含10%胎牛血清DMEM培养基，5%二氧化碳、37 ℃培养箱孵育，每2～3 天加入胰酶消化、传代。……