叶静静，陈天兵

胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme, GBM)是最常见和恶性程度最高的颅内肿瘤，具有病程短、进展快、预后差、死亡率高的特点。目前传统治疗方法，如放化疗等并没有明显改善胶质瘤患者的预后。长链非编码RNA( long non-coding RNA, lncRNA)是一类长度超过200核苷酸但不编码蛋白质的RNA分子，参与调控细胞增殖、分化、凋亡等多种与肿瘤形成和发展相关的生物学过程。SNHG9是一个在肿瘤组织中具有较高表达丰度的lncRNA，然而其在肿瘤中的功能却较少报道。该实验旨在利用高效率和操作流程简单的基因编辑方法CRISPR/Cas9来构建 SNHG9基因敲除的胶质细胞瘤细胞株，观察SNHG9敲除对胶质瘤细胞增殖能力的影响，并通过生物信息学分析探讨SNHG9可能参与的生物学过程，为进一步深入研究SNHG9的功能和分子机制打下基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料

胶质瘤细胞株U251购自上海中国科学院细胞库。px330-EGFP载体源自px330-mCherry(美国Addgene公司, 货号：98750)，由本实验室改造而得(通过Not I位点将mCherry表达模块替换成EGFP表达模块)。南美胎牛血清购自美国Gibco公司；胰蛋白酶及DMEM 高糖培养基购自美国Hyclone公司；lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司； BbsI、Buffer 2购自美国NEB公司； T4、感受态细胞购自日本Takara公司；基因组提取试剂盒、胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒购自美国Omega公司；6/24/96孔板、Yeast extract、Tryptone、琼脂糖和琼脂粉等购自上海碧云天生物技术有限公司；RTCA实时无标记细胞分析仪(型号为xCELLigence RTCA DP)购自艾森生物(杭州)有限公司；倒置荧光显微镜(型号：尼康Ti-U型)购自日本尼康公司。

1.2 方法

1.2.1

靶点和检测引物设计 从Ensembl上下载SNHG9所在位置上的基因组序列(含内含子、外显子、不同转录本序列信息)，分别截取基因上游和下游约800 bp序列用作靶点和检测引物的设计。……