李海宁，郑瑞芳，都研文，王 文，孙芳玲，刘砥威，邢建国*

田蓟苷抗脑缺血再灌注程序性坏死的作用及机制研究

李海宁1，郑瑞芳2，都研文2，王 文3，孙芳玲3，刘砥威2，邢建国2*

1. 石河子大学药学院，新疆 石河子 832000 2. 新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830002 3. 首都医科大学宣武医院，北京 100053

研究田蓟苷抗脑缺血再灌注损伤程序性坏死的作用及机制。人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用Caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理16 h后缺氧培养6 h、复氧培养2 h建立脑缺血再灌注程序性坏死模型，在缺氧前6 h给予田蓟苷进行干预。采用Hoechst33342/PI染色检测坏死细胞数目；采用CCK-8法检测细胞活力；采用ELISA法检测细胞上清中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平及细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平和线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore，mPTP）的变化；采用荧光显微镜检测细胞线粒体膜电位变化；采用Western blotting法检测细胞程序性坏死通路相关蛋白如受体相互作用蛋白3（receptor interacting protein kinase 3，RIPK3）、混合系结构域样蛋白（mixed lineage kinase domain-like protein，MLKL）、钙/钙调蛋白依赖性激酶II（calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ，CaMKⅡ）、磷酸甘油酸变位酶5（phosphoglycerate mutase family 5，PGAM5）表达情况。与模型组比较，田蓟苷组细胞存活率显著提高（＜0.05）；细胞上清中LDH活性和IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低（＜0.05）；细胞内ROS水平显著降低（＜0.05）；细胞线粒体膜电位显著升高（＜0.05），mPTP开放被显著抑制（＜0.05）；细胞RIPK3、MLKL、CaMKⅡ和PGAM5蛋白表达水平均显著降低（＜0.05）。田蓟苷可能通过抑制程序性坏死途径，保护线粒体，从而发挥抑制脑缺血再灌注损伤的作用。

田蓟苷；人神经母细胞瘤细胞；程序性坏死；线粒体；受体相互作用蛋白3

脑缺血再灌注会导致严重的炎症和氧化应激，从而加剧缺血损伤[1]。……