马疱疹病毒5型的鉴定及遗传进化分析
2021-04-06佟盼盼宋小珍任美灵贾陈阳帕丽旦努尔兰谭美玲谢金鑫
佟盼盼,张 磊,宋小珍,任美灵,贾陈阳,帕丽旦·努尔兰,谭美玲,况 玲,谢金鑫
(新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052)
在马属动物中迄今已鉴定出9种疱疹病毒(Equid herpesvirus,EHV),即EHV-1~EHV-9,其中EHV-1、-3、-4、-6、-8、-9属于α-疱疹病毒亚科,EHV-2、-5、-7属于γ-疱疹病毒亚科[1]。马是EHV-1、-2、-3、-4、-5的自然宿主[1]。EHV-5可导致马呼吸道疾病,表现为咽炎、有鼻和眼分泌物、呼吸急促、咳嗽、发热、淋巴结肿大、食欲减退等,呈地方性散发感染,在患马的鼻腔分泌物、外周血单核细胞以及淋巴器官中可检测到该病毒[2-7]。近年来已有多个国家和地区报道了EHV-5在马上的流行情况,但对该病毒的发病机制了解较少,缺乏对该病毒引起疾病的有效治疗方法[2-7]。我国对EHVs研究仅限于EHV-1和EHV-8[8-9],尚缺少对EHV-5流行现状的报道及相应的检测方法。
gH糖蛋白的分子质量大小约55 ku,由498个氨基酸的多肽组成,共有11个糖基化的潜在位点与其N端连接,目前是病毒融合蛋白中唯一呈现出经典结构的糖蛋白,可刺激机体产生中和抗体是EHV-5中具有重要意义的囊膜蛋白[10]。本研究首次在国内马匹鼻拭子样品中检测到EHV-5,并对病毒gH基因进行同源性和遗传进化分析,可为EHV-5的流行病学研究提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品 本实验室于2018年从新疆乌鲁木齐某马术俱乐部采集226匹临床健康纯血马鼻拭子样品。
1.1.2 主要试剂 Viral Nucleic Acid Extraction Kit,旭基生物科技有限公司产品;胶回收试剂盒,天根生化科技有限公司产品;DNA Marker DL 2 000、Reverse Transcriptase M-MLV、Klenow Fragment、Ribonuclease H、ExTaq,宝生物工程(大连)有限公司产品。
1.2.3 主要仪器设备 普通PCR仪和5415 R冷冻型离心机,Eppendorf公司产品;凝胶成像仪,Bio-Rad公司产品;……
