高 睿，李河林，焦铁军，罗 艳，仇薪鑫，裴党帅

(1.杨凌职业技术学院,陕西杨凌 712100；2.榆林学院，陕西榆林 719000；3.杨凌绿方生物工程有限公司，陕西杨凌 712100；4.渭南市动物卫生工作站，陕西渭南 714000)

国内外对 PCV2 疫苗的研究主要是从灭活疫苗、亚单位疫苗、重组腺病毒基因工程疫苗、嵌合病毒疫苗以及核酸疫苗等方面进行。商品化的PCV2疫苗一般为全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗。因亚单位疫苗价格相对昂贵，目前市场上使用范围较广的多为全病毒灭活疫苗。全病毒灭活疫苗的生产主要采用猪肾细胞系(PK-15细胞)培养，但PCV2在PK-15细胞系上增殖病毒滴度不高，一般仅为104～105TCID50/mL[1-2]，这成为了制约 PCV2全病毒灭活苗疫苗开发的技术瓶颈。因此，研究提高PCV2在细胞内增殖滴度的方法成了PCV2全病毒灭活苗开发需要克服的最大困难。

促进PCV2在细胞中高效增殖的途径有两种，一种为刺激细胞促进PCV2增殖的方法，另一种为改造和筛选细胞促进PCV2增殖的方法[3]。本文以PCV2病毒不同转瓶培养生产工艺为基础，采用添加促进PK-15细胞孵育剂的方法，比较PCV2在转瓶细胞培养中高效增殖的不同工艺，以期对猪圆环病毒灭活疫苗生产企业及对病毒与宿主相互作用机理的基础研究具有一定的借鉴意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒种和细胞 猪圆环病毒2型DBN-SX07株，种毒滴度为105.5TCID50/mL，由杨凌绿方生物工程有限公司保存；贴壁依赖性 PK-15 细胞(猪肾细胞系) 购自中国兽医药品监察所。

1.1.2 抗体 FITC标记的羊抗鼠IgG，KPL公司产品；鼠源抗PCV2衣壳蛋白单克隆抗体，JBT公司产品。……