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马疱疹病毒1型gG蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

2021-04-06王旭蕾加尔肯车传忠刘建华郑学功王雪竹冉多良

动物医学进展 2021年4期
关键词:血清检测方法

王旭蕾,胡 月,加尔肯,车传忠,刘建华,郑学功,王雪竹,冉多良

(新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052)

马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis,ER)是马属动物的发热性急性传染病的总称。引发该病的病原体主要是马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4)[1-2]。EHV-1是一种引起马匹不同临床综合征的病原体,具有高度传染性,主要引起呼吸系统和神经系统疾病的发生,母畜流产和新生儿死亡[3-4]。近年来,新疆的马产业在不断地发展,据2014年-2017年新疆地区的调查显示,ER在新疆广泛流行,严重制约着新疆养马业的发展。EHV-1引起的疾病发病率和病死率较高,但却没有针对EHV-1的血清学检测方法[5-11],对EHV-1的防控工作带来巨大的困难。gG基因部分氨基酸的同源性低可区分EHV-1和EHV-4[12-13],由于两种病毒之间广泛的免疫交叉反应[14],在实验室常规检测中,无法从血清学角度区分[1]。目前国外已有商品化的EHV-1/4的ELISA抗体分型试剂盒,但价格昂贵,不适用于大量检测血清样本,而国内没有类似的试剂盒[12-15]。因此,需要建立一种价格低廉、快速、敏感且能大量检测血清样本的EHV-1抗体的方法。

本试验旨在对已获得的EHV-1gG基因的181-343位氨基酸表达的蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测EHV-1抗体的间接ELISA方法,为新疆EHV-1的快速检测和流行病学调查提供技术支撑[16-17]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒和血清 含有pGEX-4T-1-gG重组质粒的E.coliBL21(DE3)菌株,EHV-1阳性、阴性血清,EHV-4 阳性血清,马流感病毒(EIV)阳性血清,马动脉炎病毒(EAV)阳性血清均由新疆农业大学动物医学学院传染病实验室保存。

1.1.2 主要试剂 TMB显色液和DAB试剂盒,北京索莱宝科技有限公司产品;……

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