郭承意，仝丽娜，周 雷，李增魁，文 英，刘海金，杨增岐*，高小龙*

(1.青海大学农牧学院，青海西宁 810000；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种烈性传染病，能够在鸡和多种禽类中广泛传播，是威胁养禽业的最主要疫病之一[1]。鸡感染后主要临床特征为呼吸困难、腹泻、神经紊乱以及黏膜和皮肤出血。世界动物卫生组织(OIE)将新城疫列为必须报告的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。NDV为不分节段单股负链RNA病毒，属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)、副黏病毒亚科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Aoulavirus)[2]。NDV基因组由15186、15192或15198个核苷酸组成，全基因组上依次排列着NP、P、M、F、HN和L基因，分别编码核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经酪氨酸(HN)和大分子蛋白(L)[3]。

反向遗传技术是研究生物基因与性状关系，通过分子生物学技术在DNA水平对遗传物质进行一系列操作(如突变、缺失、插入、替换等)，进而探究基因改变对生物性状的影响。人们已经构建了许多重组病毒，通过对比重组病毒和亲本毒株的差异，阐明了影响病毒毒力、复制能力、抗原位点变异、组织嗜性等许多科学问题[4-6]。NDV重组病毒的研究为后续NDV感染性克隆试验奠定了一定的基础[7]。近年已有多种NDV感染性克隆构建系统，根据全长cDNA转录载体转录时所用启动子不同，可将NDV感染性克隆分为两种，一种是基于T7启动子系统，另一种是巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子系统[8]。根据全长cDNA克隆的方法不同，又可分为传统酶切连接克隆法、不依赖酶切的克隆法(LIC)和合成克隆法。……