张晓龙，孟帅，吴春暖，熊冬生，张洁

1 天津医科大学肿瘤医院，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060；2 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院

在肿瘤的免疫治疗中，激活的T 细胞对肿瘤细胞具有强大的杀伤能力。然而传统的单克隆抗体治疗不能有效募集T细胞至肿瘤微环境。可同时识别两个不同靶抗原的双特异性抗体（BsAbs）［1］有望克服这一问题。最具有代表性的BsAbs是用于治疗前B 细胞急性淋巴母细胞白血病的双特异性T 细胞衔接子（BiTE）blinatumomab［2-3］。但blinatumomab 半衰期短，给药时间长，患者用药不便，并增加治疗相关不良反应发生率［4］。为解决BiTE 在体内半衰期短的问题，有研究人员设计了一种串联四价双特异性抗体（TandAb）［5-6］。本课题组前期研究将抗CD3 单克隆抗体（HIT3a）和抗CD19 单克隆抗体（HIT19a）的可变区序列通过不同长度的柔性肽连接，设计了串联四价双特异性抗体Tandab（CD3/CD19），验证了其与CD3+细胞或CD19+细胞具有良好的结合活性［7］，且在体内外能有效介导T 细胞对CD19+肿瘤细胞的杀伤［8］。然而T 细胞在活化过程中往往需要第二信号的协同刺激，因此，本课题组在Tandab（CD3/CD19）的基础上引入4-1BBL 胞外结构域，设计了一种融合蛋白Tandab（CD3/CD19/4-1BBL）。2018 年12 月—2020 年6 月，本研究观察了Tandab（CD3/CD19/4-1BBL）介导的T 细胞对B 细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要实验材料 人急性T 淋巴细胞白血病细胞Jurkat、人B 细胞淋巴瘤细胞Raji由本实验室保存，正常人外周血由天津市血液中心提供，以上细胞均用含10% FBS、2 mmol/L L- 谷氨酰胺的RPMI-1640 培养基于37 ℃、5% CO2饱和湿度培养箱中培养。……