方 超，张智明，李建华，何世岷

（哈药集团 生物疫苗有限公司，哈尔滨150069）

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病毒（PRV）引起的一种大多数哺乳动物及一些禽类的急性、烈性、高度接触性传染病，是一种能感染神经系统的疾。动物感染后出现发热、瘙痒等神经症状、脑脊髓炎或死亡等临床症状。PR是影响全球猪养殖业的主要的传染病之一，给世界各国养猪业造成的经济损失十分巨大。因此，世界各国对此病十分重视，并开启和实施了根除PR的计划，且取得了阶段性的胜利[1-5]。但自2010年起，PRV出现新的变异株，使PR在全球尤其是我国出现新一轮的暴发，有很多PRV变异毒株被分离和鉴定[6-9]。黑龙江省是一个养猪大省，部分地区也存在PR的流行，因此，在黑龙江省进行PRV的分离与鉴定，有助于了解病毒的流行情况，并为伪狂犬病的防控提供帮助[10]。

本研究对经过鉴定、纯化的PRV现地分离株进行继代培养，与经典PRV Ra株对比绘制病毒生长曲线，以确定其最佳培养时间，并检测该分离株对不同动物的致病力，以期为后续试验的顺利开展做好铺垫。

1 材料

1.1 样品

已纯化的PRV现地分离株，中国兽医药品监察所惠赠；经典PRV Ra株，购于中国兽医药品监察所，由哈药集团生物疫苗有限公司研发中心传代保存。

1.2 细胞及主要试剂

F16代Vero传代细胞系，由哈药集团生物疫苗有限公司研发中心保存；DMEM F12培养基，含0.25% EDTA胰酶，购自GIBCO公司；胎牛血清，购自CLARK公司；PBS溶液，由哈药集团生物疫苗有限公司研发中心配制；DNA/RNA提取试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司；……