脑源性神经营养因子及其受体在小鼠卵母细胞第一极体释放中的作用
2021-04-03王朕华井佳雨伊克运李相禹
李 娜 王朕华* 王 悦 井佳雨 伊克运 李相禹
1.河南省人民医院(郑州,450003);2 .郑州大学人民医院;3.河南大学人民医院
成熟卵母细胞对于高质量受精卵的形成和胚胎的健康发育是至关重要的。在卵泡生长发育成熟过程中不仅下丘脑-垂体-卵巢轴发挥着重要的作用,同时卵巢中卵母细胞和颗粒细胞等通过自分泌和旁分泌双向交流的方式同样发挥着重要的作用。近年研究发现,存在于中枢神经系统的脑源性神经营养因子(BDNF)不仅对多种神经元的成活、生长和分化有重要功能,同时也在神经元以外的细胞发育过程中也发挥重要作用[1-3]。近年研究认为,BDNF及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)在卵巢中表达[4],但对BDNF及TrkB在卵母细胞释放第一极体中作用的研究少见。本研究利用基因芯片技术,探讨BDNF及TrkB在小鼠卵泡中的表达及其在卵母细胞释放第一极体中的作用。
1 材料与方法
1.1 试剂
BDNF和孕马血清促性腺激素(PMSG)购自艾美捷科技有限公司,注射用绒毛膜促性腺激素(hCG)购自丽珠集团丽珠制药厂。Trizol试剂购自Reagent,Invitrogen公司,纯化试剂盒购自RNeasy Mini kit,Qiagen公司;实时定量荧光PCR(RT-PCR)试剂由南京瑞源生物技术有限公司提供,甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白购自西安齐岳生物科技有限公司。
1.2 实验动物
来自中科院上海动物中心的未发育成熟的21日龄雌性B6D2F1小鼠,体重20~25g,按三级动物要求饲养。
1.3 方法
1.3.1模拟卵泡发育成熟和排卵每只小鼠注射7.5U PMSG[PMSG中含有活性的卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH),但以FSH作用为主]促卵泡发育;48h后注射5U注射用hCG促卵泡成熟和排卵。……
