李风波，孙晓雷，马剑雄，马信龙

（天津市天津医院骨科，天津300211）

随着社会老龄化进展，骨质疏松已经成为常见的老年疾病，人群数量逐渐上升［1］。正常人骨重塑靠破骨细胞发挥骨吸收功能，以及成骨细胞发挥骨形成，两者之间相互平衡、相互制约［2］。骨质疏松症病人骨重塑过程中骨吸收大于骨形成，从而造成骨量丢失［3］。目前治疗骨质疏松的药物多数有较大副作用［4］，因此，研究者越来越看重天然药物的开发。国内外研究报道柚皮苷药理作用广泛，能够促进成骨细胞的分化、增殖［5～7］。但尚未有报道柚皮苷对破骨细胞凋亡及其机制的研究。因此，本研究探讨了柚皮苷对破骨细胞凋亡的作用，进一步揭示该药物的作用机制。

1 资料与方法

1.1 薄骨片的制备

牛股骨干粗切获取皮质骨，进一步采用锯片沿股骨纵轴切成厚度约为100 μm骨片，对骨片采用细砂纸进行打磨平滑，裁剪骨薄片（大小约为0.5 cm×0.5 cm），75%酒精浸泡30 min消毒后，采用无菌D-hank's液清洗三遍，置于培养基中4℃备用，取出晾干薄骨片表面液体后使用。

1.2 破骨细胞诱导

将由中国协和医科大学基础医学细胞中心提供的RAW264.7细胞株，分别接种于6孔板中预置的无菌玻片或上述方法制备的薄骨片之上，接种密度2×104/cm2，2 h待细胞贴壁后，更换成高糖DMEM破骨细胞诱导培养基，内含10% FBS和100 ng/ml RANKL，37℃、5% CO2的培养箱中进行诱导培养，2天换一次破骨细胞诱导培养液。

1.3 柚皮苷处理

配制含柚皮苷 0 μg/ml（空白对照）、2 μg/ml、20 μg/ml和200 μg/ml的DMEM培养液。于破骨细胞诱导培养5 d后，更换为上述不同柚皮苷含量的DMEM培养液，在37℃、5% CO2的培养箱继续培养3 d。……