李 嘉，高 玲，杨孝芳，张 军，蒲 翔，施杨婉玲

(贵州中医药大学，贵阳 550025)

肝癌是最常见的结缔组织瘤之一，每年在全世界范围有60万新增患者，其恶性程度仅次于胃癌和食道癌，在所有肿瘤相关性死因中排在第三位[1]。中药对减轻肝癌患者的临床症状，提高患者的生存质量和免疫功能、预防复发和转移都具有重要作用[2]。课题组以“毒损肝络”理论为用药的指导依据，自拟健脾活血祛湿方辅助治疗肝癌。前期研究结果显示，本方可显著提高肝硬化腹水大鼠线粒体水通道蛋白8、9(aquaporin8、9，AQP8、9)的表达，减轻线粒体水肿，同时促进线粒体ATP合成，改善肝功能，提高细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase，COX)活性表达，促进肝癌细胞在线粒体途径的凋亡[3]。为进一步研究本方在治疗肝癌中可能存在的作用及作用机制，课题组进行体外培养H22肝癌细胞，在不同剂量健脾活血祛湿方的给药干预下，观察细胞的增殖抑制率、凋亡率及线粒体膜电位和AQP9的改变，为中医药治疗肝癌提供实验依据。

1 材料

1.1 细胞株

H22小鼠肝癌细胞，购自中南大学湘雅医学院细胞保存中心。

1.2 实验药物

健脾活血祛湿方组成：五爪龙30 g，白术30 g，白背叶根30 g，猪苓15 g，田基黄20 g，茜草15 g，土鳖虫10 g，砂仁5 g(后下)，全部药材均购自贵阳中医学院第一附属医院药房，符合《中华人民共和国药典》2010年版要求。先加蒸馏水浸泡40 min，一煎加药材量的8倍水，沸腾后煎40 min；二煎加药材量的6倍水，沸腾后煎30 min过滤，2次所得滤液混合后干燥浓缩至15 ml，-20 ℃保存备用。以1 g/m1的原液，80 ℃水浴30 min，连续3 d灭活后，1000rpm离心10 min，-20 ℃保存备用。……