周殿儒，程阔菊，吴 庆，冯胜红，罗健华，黄 河，罗 云

(1.四川省达州市中西医结合医院药学部，四川 达州 635000 2.陆军军医大学第二附属医院麻醉科，重庆 400037)

carabin是Pan等研究学者于2007年发现的一个新的钙调磷酸酶(calcineurin,CaN))结合蛋白，主要表达于免疫细胞T和B细胞中，因同时可与calcineurin和Ras相互结合及作用，将其命名为carabin[1]。Pan等学者[1]的研究表明，carabin与CaN结合后可负反馈抑制CaN-NFAT通路，与Ras结合可特异性抑制Ras-ERK1/2通路。在人体免疫细胞T和B细胞活化过程中通过负反馈抑制CaN-NFAT通路和抑制Ras-ERK1/2通路阻断免疫细胞的持续活化，进而阻断免疫细胞持续活化而导致的过渡免疫，在机体免疫平衡中发挥着非常重要的作用[2～4]。进一步通过蛋白组学研究发现，carabin在人心肌细胞中亦有表达，并在小鼠心肌细胞中得到验证。通过小鼠carabin基因敲除证实，carabin蛋白可抑制小鼠冠状动脉左前降支部分结扎诱导的心肌细胞肥大[5]，并提出carabin有望成为临床在心衰方面诊治心肌肥厚的新靶点[6]。我们的前期研究也发现，carabin在缺血/缺氧诱导的人心室肌细胞株AC16及小鼠梗死心脏中表达均显著降低[7]，提示carabin可能会在心肌梗死方面起到一定作用，但目前尚无相关研究。鉴于此，本研究拟采用选择性噬心脏9型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)，构建人carabin的9型重组腺相关病毒载体(rAAV9-carabin-IRES- ZsGreen)，通过感染人心室肌细胞株AC16，验证carabin蛋白过表达效果。为carabin蛋白在心肌梗死中的进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1材 料

1.1.1细胞株及质粒:293 AAV 细胞株及腺相关病毒载体质粒(深圳百恩维生物科技有限公司)，pUC57- carabin质粒由本实验室提供。……