陈 昆，邱建利

(1. 河南省驻马店市中心医院普外腔镜外科，河南 驻马店 463000；2. 河南中医药大学第一附属医院新生儿重症医学科，河南 郑州 450000)

胆道闭锁(biliary atresia，BA)的肝纤维化呈进行性发展的趋势，最终会发展为终末期肝硬化。有研究表明，miR-145靶向Smad3可能是调控BA发病过程中肝纤维化的重要机制。川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)对刀豆蛋白A、四氯化碳诱导的肝纤维化具有改善作用[1-2]，但TMP在BA治疗中的作用未见报道。本研究将以miR-145为切入点、在BA动物模型中观察TMP对肝纤维化及Smad3信号通路的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料出生3 d的Wistar幼鼠购自上海茂生衍生物科技有限公司；HE染色试剂盒、Masson染色试剂盒购自上海碧云天公司；透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)检测试剂盒购自上海西唐公司；Smad3一抗购自Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1动物实验 采用胆总管结扎的方法建立BA模型，给予TMP、miR-145抑制物慢病毒干预，连续28 d。

1.2.2肝脏病理改变的检测 肝脏组织制作病理切片，进行HE染色和Masson染色并观察病理改变。

1.2.3血清肝纤维化指标检测 取血清并采用试剂盒检测HA、LN含量。

1.2.4肝脏中miR-145表达的检测 取肝脏组织并提取miR，采用荧光定量PCR法检测miR-145的表达量。

1.2.5肝脏中蛋白表达的检测 取肝脏组织并提取蛋白，采用western blot检测Smad3的表达水平。

1.3 统计学方法采用SPSS 21.0软件进行途径分析，计量资料的多组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 TMP改善BA动物模型肝纤维化与对照组比较，BA组肝脏出现肝纤维化，血清HA、LN的含量增加；TMP干预后，TMP组肝纤维化改善，血清HA、LN的含量减少。

2.2 TMP对Smad3及miR-145表达的影响与对照组比较，BA组肝脏中Smad3的表达水平明显增加，miR-145的表达水平明显减少(P<0.05)；与BA组比较，TMP组肝脏中Smad3的表达水平明显减少，miR-145的表达水平明显增加(P<0.05)。

2.3 miR-145在TMP改善BA动物模型肝纤维化中的作用加用miR-145抑制物后，肝纤维化加重，血清HA、LN的含量明显增加。

2.4 miR-145在TMP调控BA动物模型Smad3中的作用加用miR-145抑制物后，肝脏中Smad3的表达水平明显增加(P<0.05)。

3 讨论

TMP具有抗纤维化作用，本研究采用TMP治疗BA。在BA造模后给予TMP干预，结果显示肝纤维化明显改善，血清中肝纤维化指标HA、LN含量明显降低，表明TMP用于BA治疗能够起到抗纤维化作用。

miR-145靶向调控Smad3在肝纤维化进程中起关键作用[3-4]，本研究发现TMP用于BA干预能够增加miR-145表达、抑制Smad3表达。在TMP干预的同时加用imR-145抑制物后，Smad3增加且TMP改善肝纤维化的作用削弱。

综上所述，川芎嗪能够改善BA动物的肝纤维化，增加miR-145并靶向抑制Smad3是可能的分子机制。