黄 鲜 张丽涓 王 平

成都中医药大学附属成都市第五人民医院重症医学科，四川成都 611130

重症急性胰腺炎（SAP）是临床常见的急腹症，极易波及周围脂肪组织及相邻器官[1]。研究显示，SAP 并发急性肾损伤（AKI）的风险较高，可达14%～43%[2]，且预后差，死亡率高达71%～84%[3]。目前，临床中常使用血清肌酐值来预测AKI 的发生，但其水平变化时肾功能损害常常超过一半[4]。微小RNA-10a（miR-10a）是一种调控基因转录的非编码RNA，有研究显示其对AKI 的发生及进展具有促进作用，但具体机制尚未阐明[5]。白细胞介素-33（IL-33）是IL-1 家族成员之一，其可通过刺激不同细胞因子的释放加重炎症反应，促进胰腺出血坏死及器官损伤[6]，其也可能诱导了AKI发生，但具体量化关系鲜有报道。鉴于此，本研究分析血清miR-10a、IL-33 水平对SAP 患者并发AKI 的预测价值，以期为AKI 的早期诊治提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016 年1 月—2019 年12 月于成都中医药大学附属成都市第五人民医院（以下简称“我院”）就诊的SAP 患者163 例作为研究对象，根据是否并发AKI分为AKI 组（48 例）和非AKI 组（115 例）。纳入标准：①符合SAP 诊断标准[7]；②AKI 的诊断符合指南中的相关标准[8]。排除标准：①既往慢性肾病疾病史；②近1 个月内感染性疾病史；③恶性肿瘤；④肾小球肾炎、肾血管性疾病、泌尿系梗阻、肾毒性药物应用等其他原因导致的AKI。入组患者家属均签署知情同意书，本研究经我院医学伦理会审批同意。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 查询病历系统，收集并记录入组对象的基本资料，包括年龄、性别、Ranson 系统评分。

1.2.2 血清学指标的检测 ①严格按照检测试剂盒操作说明，检测血清中IL-33 和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的水平，检测试剂盒均购于BIM公司（美国，货号：fs-E3739、WASH 036-30）。②使用定量聚合酶链反应检测血清中miR-10a 的水平，主要步骤包括：总RNA 提取-逆转录-PCR 扩增，PCR 反应条件：95℃预变性5 min、95℃变性10 s、60℃退火20 s、72℃延伸20 s，共循环40 次。逆转录试剂盒购于Takara 公司（日本），miR-10a 引物序列由生工生物工程有限公司提供（上海）：上游（5’-GGAGGGGTACGGAGGGGTACCAGAATCCCATTTTGGCCA-3’）、下 游（5’-GGAGGAAGCTTGCGGAGTGTTTATGTCAACT-3’）。③使用全自动生化检测仪（美国）检测其他生化指标：血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（Cys-C）、超敏C 反应蛋白（hs-CRP）、降钙素原（PCT）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件对所得数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（）表示，采用独立样本t检验。计数资料以例数或百分比表示，采用χ2检验。采用logistic 回归分析SAP 患者并发AKI 的影响因素，使用受试者工作特征曲线计算miR-10a、IL-33 对SAP 患者并发AKI 的预测价值。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清miR-10a、IL-33 水平及一般资料的比较

两组年龄、性别、Scr、BUN、Cys-C 比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。AKI 组血清中miR-10a、IL-33、Ranson 评 分、hs-CRP、PCT、NGAL 明 显 高 于 非AKI组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

表1 血清miR-10a、IL-33 水平及一般资料的比较（）

表1 血清miR-10a、IL-33 水平及一般资料的比较（）

注：Scr：血肌酐；BUN：尿素氮；Cys-C：胱抑素C；miR-10a：微小RNA-10a；IL-33：白细胞介素-33；hs-CRP：超敏C 反应蛋白；PCT：降钙 素原；NGAL：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白；AKI：急性肾损伤

2.2 SAP 患者并发AKI 的影响因素分析

logistic 多因素回归分析显示，miR-10a（OR=1.764）、IL-33（OR=1.863）、Ranson 评分（OR=1.631）、hs-CRP（OR=1.547）均是SAP 患者并发AKI 的危险因素（P ＜0.05）。见表2。

表2 SAP 患者并发AKI 的影响因素分析

2.3 miR-10a、IL-33 对SAP 患者并发AKI 的预测价值

miR-10a、IL-33 预测SAP 患者并发AKI 的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.828、0.807，二者联合预测的AUC 为0.893，高于miR-10a（Z=4.593）、IL-33（Z=4.556），差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3、图1。

表3 miR-10a、IL-33 对SAP 患者并发AKI 的预测价值

图1 miR-10a、IL-33 预测SAP 患者并发AKI 的ROC 曲线

3 讨论

SAP 是临床中常见且病死率较高的急腹症，肾脏是其最常累及的胰外器官之一，既往认为肾脏损伤源于SAP 引发的肾供血异常，但最近的研究显示AKI的发生与大量炎症介质的释放及肠黏膜屏障功能破坏引发的感染有关[9-10]。本研究观察到SAP 并发AKI患者血清hs-CRP、PCT、NGAL 及Ranson 评分明显增高，进一步分析发现Ranson 评分、hs-CRP 均是AKI的危险因素，Ranson 评分可反映SAP 患者的病情严重程度，hs-CRP 可反映SAP 患者的全身炎症反应状态，提示SAP 病情越重、炎症反应越剧烈，其对肾功能损害越严重[11-12]，AKI 的发病风险也越高，临床中可据此早期预防。目前，预测SAP 并发AKI 的指标多较为滞后，且受年龄、肌肉含量等多方面的影响[13]，现阶段AKI 的早期评估并不理想。

微小RNA 是一类非编码RNA 小分子，其可通过与非编码区域的miRNA 调节元件结合，抑制靶mRNA的翻译进而调控基因的转录，参与众多疾病的发生[14-15]。miR-10a 是miRNA 成员之一，其在肾脏调控和介导损伤中发挥重要作用[16]。相关[17-18]研究发现脓毒症患者血清miR-10a 预测AKI 的特异度可达81.23%，且与AKI 的严重程度相关。miR-10a 能否作为预测SAP 患者AKI 发生的有效指标，目前鲜有报道。本研究结果显示，SAP 并发AKI 患者血清miR-10a 水平明显升高，且miR-10a 是AKI 的危险因素。提示miR-10a升高可增加SAP 并发AKI 的风险，进一步分析显示miR-10a 预测AKI 的灵敏度和特异度均较高，这也进一步证实了miR-10a 可以作为预测AKI 的可靠指标之一。miR-10a 介导肾损伤的机制尚不清楚，可能与其提高肿瘤坏死因子-γ 及IL-2 等炎症因子的表达，进而调节免疫应答和介导肾损伤有关[19]。

炎症介质不仅导致肾血管强烈收缩引发缺血，还可通过本身的毒性造成肾功能损伤[20]。IL-33 作为炎症介质之一，机体发生创伤或重度感染时，其大量表达，引起内皮细胞和上皮细胞损伤[21]。IL-33 在炎症早期即可大量释放，其不仅刺激各种细胞因子产生炎症因子放大炎症反应，同时还可以诱导Th2 细胞的分化，提升全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭的风险，其主要通过结合免疫细胞ST2R，激活转录因子AP-1 和核因子κB，进而促进炎性因子的表达[22]。有研究[23]显示顺铂介导的AKI 小鼠血浆中IL-33 水平明显升高，且加重AKI 病情，还有实验[24]证实AKI 小鼠血清IL-33 水平的升高早于Scr，但其对人类SAP 并发AKI 的预测价值尚未可知。本研究结果显示，SAP并发AKI 患者血清IL-33 显著升高，且IL-33 是AKI的危险因素，进一步分析显示IL-33 预测AKI 的AUC可达0.807，灵敏度和特异度可达74.35%、87.14%，提示IL-33 的升高增加了AKI 的发病风险，且其对AKI具有较高的预测价值，究其原因，笔者推测IL-33 的升高加重了SAP 患者的炎症反应，进而引发肾损伤[25]。此外，本研究还显示miR-10a 联合IL-33 预测AKI的AUC 高于miR-10a、IL-33 任一单项指标，提示miR-10a 和IL-33 在介导肾损伤的过程中可能有相互促进作用，二者的联合检测有助于SAP 患者并发AKI 的早期诊断。

综上所述，SAP 并发AKI 患者血清中miR-10a、IL-33 水平明显升高，且二者对AKI 具有较好的预测价值，二者联合检测可为AKI 的早期识别提供帮助。