李泽信，王 霄，王 迎，张永强，狄文玉，王建国

(1.新乡医学院第一附属医院肝胆胰外科，河南 卫辉 453100；2.新乡医学院药学院，河南 新乡 453003；3.新乡医学院第一附属医院麻醉科，河南 卫辉 453100；4.新乡医学院第一附属医院病理科，河南 卫辉 453100)

肝脏手术和肝移植术后常常伴随肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)，肝细胞凋亡是HIRI的主要途径和机制，也是导致术后肝功能障碍的重要因素[1]。因此，预防与治疗缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)所致的肝细胞凋亡成为当前研究的热点[2]。非瑟酮(fisetin)具有抗氧化、抗肿瘤和改善认知功能等作用[3-5]，最近有研究证明，非瑟酮对心肌IRI具有剂量依赖性的保护作用[6]。但非瑟酮对HIRI的保护作用及其作用机制研究鲜有报道。本研究利用小鼠HIRI模型和小鼠正常肝细胞系(alpha mouse liver 12，AML-12)缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)模型，探讨非瑟酮对HIRI小鼠肝细胞凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组6～8周龄雄性C57BL/6小鼠18只，体质量20～25 g，由河南省实验动物中心提供。给予小鼠适应性喂养，12 h白昼、12 h黑夜交替，温度(25.0±1.0)℃，相对湿度45%～55%，自由进食水。将18只小鼠随机分为假手术(sham operation,SO)组、HIRI组和HIRI+fisetin组，每组6只。

1.2 细胞、试剂与仪器小鼠正常肝细胞系AML-12和达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium/nutrient mixture F-12,DMEM/F12)购自上海中乔新舟生物科技有限公司，二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、小鼠一抗β-actin和非瑟酮均购自美国Sigma公司，细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)购自江苏凯基生物技术股份有限公司，丙氨酸转氨酶(alanine transarninase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipation assay,RIPA)蛋白裂解液、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)流式细……