郎程菠 杨 耿 吴振兴

（杭州医学院 基础医学与法医学院，浙江 杭州310053）

1 材料与方法

1.1 实验材料

人肝肿瘤细胞株HepG-2 来自浙江科学医学院；F-12K 培养基选用Procell；DMEM 培养基选用HyClone；FBS 胎牛血清、PBS、DMSO、双抗、胰酶购自碧云天。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞传代

待细胞生长至培养皿的80%-90%时进行传代。弃上清，用1mlPBS 清洗两次，弃PBS，加1ml 胰酶后放置在培养箱中37℃消化1min，镜下观察细胞形态变圆后弃胰酶，加2ml 培养液用移液枪冲刷并收集细胞。将上述的2ml 混有细胞的培养液向两个空皿中各加入1ml，再将培养液补足至7ml，轻微振荡后置于培养箱中培养。

1.2.2 细胞换液

弃上清，用1mlPBS 清洗两次，弃PBS，将培养液补足至7ml，轻微振荡后置于培养箱中培养。

图1

1.3 实验过程

阶段一：

（1）将由DMEM 培养的HepG-2 细胞置于干净的细胞培养箱中培养；

（2）每隔48h 给HepG-2 细胞换液；

（3）待HepG-2 生长融合至80%-90%进行传代，分为两皿，一皿用7mlDMEM 培养（A），另一皿用2mlDMEM 和5ml F-12K混合培养（B）；

（4）72h 后观察，完全用DMEM 培养的HepG-2（C）长势良好形态正常，DMDM 和F-12K 混合培养的HepG-2（D）未贴壁细胞占多数，于是对前者进行传代，仍用7ml DMEM 培养，后者进行换液，用7ml F-12K 培养；

（5）24h 后，传代下来的两皿HepG-2（E）都正常贴壁，而经过换液的HepG-2（F）基本全部凋亡，于是将用F-12K 培养的HepG-2 收集备用，两皿正常生长的HepG-2 继续培养。

阶段二：

（6）48h 后两皿HepG-2 到了可以传代的密度，于是进行了传代，平行传代成4 皿，其中两皿继续用7ml DMEM 培养，两皿用7ml F-12K 培养；

（7）48h 后，两皿DMEM 培养的HepG-2（G）状态良好，两皿F-12K 培养的HepG-2（H）有部分的凋亡；

（8）24h 后，两皿DMEM 培养的HepG-2 状态依旧良好，于是收集冻存，两皿F-12K 培养的HepG-2 长势较稀，于是将一皿换液，依旧用7ml F-12K 培养，另一皿换液成7ml DMEM 培养；

（9）24h 后，换过液的F-12K 培养的HepG-2（I）数量恒定，而改用DMEM 培养的HepG-2（J）有增殖趋势，长势更好；……