文明，秦桢富，万茂生，苏勤有，陆将存，蒋先彪*

（1.广西壮族自治区阳朔县动物疫病预防控制中心，广西 阳朔 541900；2.广西壮族自治区阳朔县动物卫生监督所，广西 阳朔 541900）

新城疫是烈性传染病之一，农业农村部列为一类动物疫病，世界动物卫生组织（OIE）规定其为必须报告的动物传染病［1］。鸽新城疫的病原是鸡新城疫病毒，或者是一种抗原变异的新城疫病毒［2］，又称禽副粘病毒Ⅰ型，主要引起鸽子腹泻和神经紊乱［3］，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种重要传染病。1985 年我国香港首次分离到该病毒，随后珠海等多地相继出现［4-5］。对新城疫的预防主要靠疫苗免疫，目前常用疫苗有鸽禽Ⅰ型副粘病毒灭活疫苗和鸡新城疫弱毒疫苗等。有报道称鸡新城疫疫苗（I系、IV 系等）与鸽源新城疫的同源性较大，常出现免疫失败［6］。本研究对阳朔县某养鸽场的新城疫抗体消长情况进行了监测，为制定适合该场的免疫程序提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验分组及血清采集 采集阳朔县某鸽场自养石歧鸽的血清，分为母鸽（310日龄）、乳鸽（5日龄）、乳鸽（10 日龄）、乳鸽（15 日龄）四组，每组30只。采翅膀静脉血，以35 000 r/min离心15 min分离获得待检血清，-20 ℃保存备用。

1.2 试剂

1.2.1 1%鸡红细胞悬液 采集本单位实验室饲养的3 只未免疫禽流感和新城疫的健康公鸡血液，与阿氏液等体积混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗涤3次（每次以1 000 r/min离心10 min），洗涤后用PBS 液配成体积分数为1%的鸡红细胞悬液，4 ℃保存。

1.2.2 疫苗 鸡新城疫病毒（Lasota 株）、禽流感病毒（H9 亚型，HL 株）二联灭活疫苗（批号为04TZ2005015），购自普莱柯生物工程股份有限公司。

1.2.3 鸡新城疫血凝抑制试验抗原和阳性血清 鸡新城疫血凝抑制试验抗原（批号为20191120）和阳性血清（批号为20191018），购自哈尔滨国生生物科技有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 疫苗注射 试验组母鸽在30 日龄时首次注射二联灭活疫苗（肌注，0.2 mL/只），70 日龄二免（肌注，0.2 mL/只），180日龄三免（肌注，0.3 mL/只），310 日龄时采血备检。乳鸽均未注射过疫苗。

1.3.2 血凝试验（HA） 按照《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）规定的血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验方法操作。首先加稀释液：用微量移液器分别向反应板的第1～12孔加生理盐水50 μL，然后用微量移液器吸取50 μL 5倍稀释的抗原于第1 孔，反复吹打混匀后吸出50 μL 移至第2 孔，依次倍比稀释到第11 孔，吸出50 μL 混合液丢弃，第12孔作为红细胞对照不加抗原。再分别往1～12 孔中加入1%红细胞悬液50 μL，微量振荡1 min，于37 ℃恒温箱中静置10～15 min后观察结果。

结果判定：将反应板倾斜45°，若有向下线状流动者则表明红细胞未被病毒凝集或不完全被病毒凝集；如倾斜后红细胞不流动，说明红细胞已被病毒所凝集。

1.3.3 血凝抑制试验（HI） 按照《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）规定的血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验方法操作。首先按1.3.2 的方法倍比稀释血清；然后分别往1～12孔中加入4单位抗原50 μL，微量振荡1 min，于37 ℃恒温箱中静置5 min，再加入1%红细胞悬液，微量振荡1 min，放置于37 ℃恒温箱中静置10～15 min后观察结果。

结果判定：将反应板倾斜45°'，若有向下线状流动者则表明红细胞未被病毒凝集，即凝集现象被抑制；如倾斜后红细胞不流动，说明红细胞已被病毒所凝集，即凝集现象未被抑制。以完全抑制4 单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI 的滴度，HI效价大于等于4 log2判定为抗体合格。

2 结果与分析

检测结果显示：30 只母鸽中新城疫抗体水平基本都在6 log2以上，高的达到9 log2；5日龄乳鸽的抗体水平都在4 log2 以上，高的达到7 log2；30只10日龄乳鸽中有21只抗体为4 log2以上，阳性率为70%；15 日龄乳鸽的抗体水平均为阴性，阳性率为0。4 组鸽子的血清抗体检测结果如表1所示。

表1 4组不同日龄鸽子的新城疫抗体水平

3 讨论

由表1可以看出，母鸽由于多次注射疫苗，免疫抗体水平普遍较高，能起到一定的保护作用。乳鸽出壳5～10日龄内，体内仍有母源抗体保护，到15日龄母源抗体基本消失，此时迫切需要疫苗产生的抗体来保护。

疫苗免疫是预防疫病的重要手段，制定科学合理的免疫程序是保障疫苗免疫效果的重要手段。首次免疫的时间过早，容易被母源抗体中和掉，过晚免疫则感染风险增大。本试验中，乳鸽出壳15日龄即无法检测出合格的抗体水平，故肉鸽应当在12 日龄开始用鸡新城疫病毒疫苗（Lasota株）进行滴鼻基础免疫，25日龄注射新城疫I系苗（肌注，0.5 mL/只）；种用鸽应在12日龄开始用鸡新城疫病毒疫苗（Lasota株）进行滴鼻基础免疫，30日龄二免，注射二联灭活疫苗（肌注，0.2 mL/只），70 日龄三免（肌注，0.2 mL/只），180 日龄四免（肌注，0.4 mL/只）。肉鸽养殖场最好选用鸽用新城疫疫苗进行免疫接种，并且根据其他病种和免疫时间做出适当调整，以避免免疫失败。