李任 余艳芬 李春林 黎运 邱晓颖 李湖 高州市人民医院感染内科，广东茂名5500； 东莞市东城医院检验科，广东东莞53000

肝衰竭是临床常见的危急重症， 进展迅速，预后较差。 在我国引起肝衰竭的首要病因是HBV，HBV 相关的慢加急性肝衰竭（HBV-ACLF）约占肝衰竭患者总数的70%[1]。 HBV-ACLF 的致病机制比较复杂， 有研究显示HBV S 基因变异与HBV-ACLF产生相关，尤其是S 基因主要亲水区（MHR）相关变异，但以上研究均基于HBV S 基因的直接测序或逃逸相关变异分析上，涉及HBV S 基因准种角度报道较少[2-4]。 准种变异能更为真实地反映在特定时刻内宿主和病毒间的相互适应和平衡， 以及感染进化过程。本研究对HBV-ACLF 患者S 基因进行准种扩增，并以慢性乙型肝炎（CHB）患者为对照，研究S 基因准种变异特征，为探讨HBV-ACLF 发病机制提供参考。

资料与方法

一、研究对象

选取2016年1 月至2018年10 月广东省高州市人民医院收治的HBV-ACLF 患者资料，选取同期收治的CHB 患者为对照组。纳入标准：（1）符合参考文献[5-6]中HBV-ACLF 的诊断标准；（2）书面签署知情同意书。 排除标准：已行抗病毒治疗；肝硬化、肝癌等终末性肝病； 合并非HBV 等病毒感染；非HBV 导致的肝衰竭；合并严重的心、脑、肾等器质性病变者。 本研究经医院伦理委员会同意（伦理审批号：20160109）。

二、研究方法

1.HBV S 基因PCR 扩增与克隆

采集2 组患者抗病毒治疗前血液，离心后取上清液，采用DNA 提取试剂盒（美国Invitrogen 公司）从血清中提取HBV DNA， 采用巢式PCR 法扩增HBV S 基因。 第一轮：采用50 μL 体系，取0.5 μL HBV DNA 纯化产物作为模板，PCR 第一轮反应：上游引物5'-GCCTCATTTTGYGGGTCACCATATTC-3'；下游引物5'-AATTCGTTGACANACTTTCCAATCAAT-3'。 扩增条件：95℃变性10 s，退火55 ℃15 s，延伸72 ℃90 s（循环35 次），延伸72 ℃5 min。……