齐霞， 孔令雪， 李淑娟， 马思婷， 齐雅丽， 赵蕾

1. 河北医科大学口腔医学院·口腔医院牙周一科，河北省口腔医学重点实验室，河北省口腔疾病临床医学研究中心，河北 石家庄（050017）； 2.济南口腔医院牙周黏膜科，山东 济南（250001）； 3.口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院牙周科，四川 成都（610041）

牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）是牙周炎的主要致病菌。P. gingivalis 参与形成龈下菌斑生物膜，通过改变生物膜的组成及负荷，引起菌群失调，与牙周疾病的发生发展及治疗失败相关［1⁃3］。P. gingivalis 可分泌牙龈素等毒力因子直接破坏牙周组织［4］，同时，还可入侵宿主细胞使其释放大量炎症因子，如基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），导致牙周组织的继发性损伤［5⁃7］。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocate⁃chin⁃3⁃gallate，EGCG）是绿茶儿茶酸中最主要成分，占其总重的59%。研究显示每天饮用1 杯绿茶，可显著降低牙周病的发病率及严重程度［8］。用P.gin⁃givalis 感染小鼠构建牙周炎动物模型，口腔内注射40 mg/kg 的EGCG 溶液4 周发现，实验组牙周组织炎症显著减轻，且血液中上调的白介素⁃1β（interleukin⁃1β，IL⁃1β）表达水平显著降低［9］，提示EGCG 可减轻P.gingivalis 引起的牙周炎症，但其具体机制仍有待深入探究。本研究探讨EGCG 对P. gingivalis 生物膜、毒力因子的抑制作用及EGCG 对P. gingivalis 刺激的人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGFs）分泌MMPs的能力。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和仪器

EGCG（杭州禾田生物制品有限公司）；P. gin⁃givalis ATCC33277 由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供；心脑浸出液培养基（brian heart infusion，BHI）（Oxiod，英 国）；XTT 试 剂 盒（Syn⁃chem，美国）；精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（argi⁃nine gingipain，Rgp）特异性产色底物、赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（lysine gingipain，Kgp）特异性产色底物、二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT）（Sigma，美国）；……