王甩艳，张秀明，林喜荣，罗燕萍，贺玉莹，莫红梅△

1.深圳市罗湖区人民医院医学检验科，广东深圳 518001；2.深圳市罗湖医院集团医学检验中心，广东深圳 518001

精液常规检测是对男性生育能力进行评估的基础检查项目，但对精子功能的亚细胞结构不能做出评估[1-2]。精子 DNA 检测包括精子 DNA 碎片指数(DFI)和精子高DNA着色性(HDS)。精子DFI是一个被认为较各种常规精液参数更为有效的男性不育指标，可以预测自然受孕和体外受精的结果[3-5]。精子HDS指高可染性的精子即核未完全缩合的不成熟精子占总精子的百分数，反映的是精子的成熟度[6]。精子DNA损伤有关的因素包括年龄、环境污染物等[7]。本文对男性不育患者的精子DFI、HDS与其形态和患者年龄进行相关性分析，旨在探讨其在男性生殖能力评估上的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年5月至2020年1月深圳市罗湖区人民医院生殖中心的601例患者精液样本。601例患者婚后均正常性生活1年以上不育，无外伤及遗传性疾病家族史，体检未发现明显睾丸、附睾及输精管异常等，且基本排除女方不孕因素。正常形态精子百分比为0.00%～9.00%，平均(3.45±1.91)%；年龄21～72岁，平均(35.76±7.43)岁。

1.2精子形态学分析 采用改良巴氏染色，按照世界卫生组织(WHO)《人类精液检查与处理实验室手册第5版》标准[8]，进行精子形态评价，正常形态精子百分比参考范围≥4.00%。

1.3精子DFI和HDS检测方法 使用的仪器是流式细胞仪(mindray,BriCyte E6)，采用FCSAS软件分析精子的DFI和HDS。检验原理是正常精子DNA紧密结合而具有抗酸性，维持双链的稳定性，而受损的或不成熟的精子形成松散的染色质结构，其DNA在酸作用下变成单链，吖啶橙(AO)与双链 DNA结合发出绿色荧光，与单链 DNA 结合发出红色荧光，然后通过配有专用软件的流式细胞仪得出相关参数。DFI≤15%：精子DNA完整性好；15%15%：精子成熟染色质含量异常。

1.4统计学处理 采用SPSS17.0 统计软件进行数据分析，计数资料以[n(%)]表示，组间差异采用非参数检验分析，受检者的正常形态精子及患者年龄与精子 DFI和HDS 的相关性均采用Pearson相关分析。

2 结 果

2.1精液样本检测结果 受检的601例精液样本中，精子DNA完整性好的有243例(40.43%)；精子DNA完整性一般的有241例(40.10%)；精子DNA完整性差的有117例(19.47%)。精子成熟染色质含量正常的有494例(82.20%)，精子成熟染色质含量异常有107例(17.80%)。

2.2正常形态精子百分比与精子DFI和HDS的相关性 依据正常形态精子百分比将患者分为<4.00%组和≥4.00%组，分析两组精子不同程度DNA完整性和成熟染色质含量的分布情况，见表1、2。随着正常形态精子百分比的增大，精子DFI≤15%的个体所占的比率逐渐上升，而精子DFI≥30%和15%

表1 两组DFI比较

表2 两组HDS比较

2.3年龄与精子DFI和HDS的相关性 依据年龄将患者分为<35岁、35～<40岁和≥40岁3组，分析3组之间的精子不同程度DNA完整性和成熟染色质含量的分布情况，见表3、4。随着年龄的增大，精子DFI≤15%的个体所占的比率逐渐下降，而精子DFI≥30%和15%0.05)。Pearson相关分析表明患者年龄与精子DFI呈正相关(r=0.132,P<0.05)，患者年龄与精子HDS无相关(r=0.020,P>0.05)。

表3 各组DFI比较

表4 各组HDS比较

3 讨 论

精子DNA损伤是男性不育的主要分子原因，这对生育有负面影响。依据WHO指南，精液分析检测常规参数是评估男性生育能力的主要方法。然而，常规的精液分析对男性生育能力的预测是很有限的，很多时候并不能够解释男性不育的原因。在全球范围内进行精子DNA片段分析，可作为男性不育症的预后和诊断及其管理的工具[9]。近年来的研究发现，精子在受孕和胚胎发育过程中也扮演了重要角色，包括遗传物质表达异常、表观遗传规律紊乱、DNA完整性降低等。因此在评估男性生育力时，精子DNA完整性受到越来越多的关注。

精子DNA是父源遗传物质，其完整性对子代健康的重要性不言而喻。精子DNA损伤影响DNA碱基对的复制与转录，直接导致了遗传信息的缺失并影响生物转化功能，从而阻碍胚胎形成[10]。李清琴等[11]研究表明精子DFI与精子活力呈负相关，且升高水平与精子活力的下降程度有关，提示精子DNA损伤可能存在与精子活力下降相同的影响机制。前者研究的是DFI与精液常规参数相关分析，而本文在其基础上，旨在研究的是DFI和HDS与受检者的正常形态精子百分比及年龄的关系，DFI反映的是精子DNA完整性好或差，是作为检测精子DNA损伤的一个重要指标，而HDS反映精子成熟染色质含量正常与否，是对精子DNA损伤的重要补充依据。本研究结果显示，正常形态精子百分比≥4.00%与<4.00%这两组间的DFI和HDS差异有统计学意义(P<0.05)。精子DFI和HDS与正常形态精子百分比呈负相关，表明精子碎片率高且其成熟染色质含量异常可能会导致精子形态的异常，或者精子形态缺陷可伴有DNA碎片的增加和成熟染色质含量异常。而精子畸形会导致受精能力降低。

本研究各年龄组之间的DFI比较，差异有统计学意义(P<0.05)，并且年龄与精子DFI呈正相关，即年龄越大，DFI越高，精子DNA的完整性越差。但是患者年龄与精子HDS无相关,说明年龄可能对于精子染色质的成熟影响不大。CROSNOEL等[12]研究表明随着父方年龄的增大，单基因突变会每年增加两个，这对精子与受精卵的成功结合及胚胎的正常发育有着重要的作用。同时也有相关研究表明年龄增长，男性生育力下降，精液参数变差包括精子活动力、精子活率等降低[13]。因此，年龄增长导致精子DNA损伤概率增大和精子形态异常率升高。

精子DNA的损伤水平能显著性的预测宫颈内授精、宫腔内授精和体外授精等助孕手段的成功率，而且精子DNA损伤与卵细胞胞质内单精子注射及体外授精助孕治疗后的妊娠风险增加显著相关[14-15]。

精子DFI、HDS与精子形态均呈负相关，精子DFI与患者年龄呈正相关，故年龄是影响精子DNA完整性的因素之一，并且精子DNA损伤会导致精子形态的异常，因此精子DFI和HDS应与常规精液参数等综合分析，这在男性的不育原因诊断、精子生殖能力评估和人工辅助生殖结局的预测上有着非常重要的作用，同时需清楚精子DNA损伤的内在机制，有待后续进一步研究。