张言慧，高先岭，黄 魁，郭青青，袁建国*

（1.山东国力生物科技有限公司，山东 济南 250014； 2.山东国力生物技术研究院，山东 济南 250101）

由于大肠杆菌遗传学背景较清楚，生长速度快，培养基条件要求较低，容易实现高密度培养等特点，长期以来是商业生产重要目的基因的表达系统[1-2]。为了获得高水平的基因表达产物，综合考虑控制转录、翻译、蛋白质稳定性及向胞外分泌等多方面因素，设计了许多具有不同特点的表达载体，以满足表达不同性质、不同要求的目的蛋白需要[3]。此外，宿主系统本身的特性也是重要的研究对象[4]。

大肠杆菌BL21 (DE3)及其衍生菌株是目前重组蛋白表达使用最广泛的菌株[5]。与其他革兰阴性菌一样，大肠杆菌有细胞内膜与细胞外膜之分，并将细胞分成两部分空间：细胞质与细胞周质，通常重组大肠杆菌表达的重组蛋白存在于细胞质。细胞质内可溶性重组蛋白易受大肠杆菌内源性蛋白酶降解，导致表达水平低下。形成包涵体的重组蛋白可有效避免内源性蛋白酶的降解，且分离纯化方便，分离效率高，但重组蛋白的复性较困难。当含有二硫键的重组蛋白正确折叠成空间构象的时候，需利用某些信号肽和前肽序列，将重组蛋白分泌至细胞周质或细胞外的培养液中[6]。这不但有利于重组蛋白的分离纯化，也能减少内源性蛋白酶降解，周质分泌可获得具有天然一级结构的产物。同时氧化性的周质间隙可模拟真核细胞的内质网环境，便于新生肽链折叠成天然结构，从而获得具有完全生物学活性的重组蛋白。……