梅 娟，姚利利

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,我国每年新发宫颈癌13万余例[1]。人乳头状瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生的重要原因[2]。流行病学研究[3]证实高危型HPV感染的检测是宫颈癌预防的关键。安徽蚌埠地区经济发展相对落后，卫生医疗条件相对匮乏，目前相关HPV感染流行病学调查的报道较少。本研究通过分析我院妇科4 773例就诊病人HPV检测结果，旨在积累本地区妇科病人HPV感染的流行病学资料，以供预防和临床工作参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2016-2017年在我院妇科进行HPV分型检测的4 773例病人作为研究对象,年龄16～68岁。所有标本采集和检测过程均经病人本人同意。

1.2 仪器与试剂 核酸提取液试剂盒、HPV分型检测PCR试剂盒及HPV分型检测杂交试剂盒均购自亚能生物技术(深圳)有限公司；PCR扩增仪器(杭州博日科技有限公司)；自动杂交仪器(亚能生物技术深圳有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 由专业妇科医生用扩阴器暴露宫颈口，用无菌棉拭子擦拭宫颈口可见的分泌物，将宫颈刷置于宫颈口，轻柔旋转宫颈刷使其顺时针旋转4～5圈，然后将宫颈刷放入加有专用细胞保存液的取样管中保存。样本采集后立即送检病理科。4 ℃保存，3 d内检测。

1.3.2 DNA分离提取与PCR扩增 取保存有宫颈细胞的细胞保存液1.0 mL，以14 000 r/min离心5 min，弃去上清液，采用核酸提取试剂盒提取DNA。取5 μL DNA提取液，加入PCR扩增体系，扩增条件：95 ℃预变性10 min;95 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40个循环；72 ℃延伸3 min。

1.3.2 PCR产物杂交 按照试剂说明书及仪器操作指南进行操作。……