薛运波│文

1.处女蜂王的选择

选择处女蜂王，一般是以个体大、腹部硕长、行动稳健的处女蜂王为佳。准备进行人工授精的处女蜂王授精前可幽闭在小核群里，也可幽闭在框式贮王笼里。由于处女蜂王出房后所处的环境条件不同，在性成熟方面存在差异。处女蜂王出房前一天诱入核群，巢门口安装隔王栅幽闭的处女蜂王，性成熟日龄与采用相同方法诱入交尾群的处女蜂王相同，最佳授精时期为8～10日龄。蜂王出房后一直幽闭在框式贮王笼内，则性成熟时间要推迟2～3 天，此方法幽闭的处女蜂王授精最佳时期为10～13日龄。授精过早，由于处女蜂王未到性成熟期，虽然已经授精，但精子转移到蜂王受精囊的速度较慢，精液在蜂王输卵管内滞留时间过长，授精蜂王迟迟不能产卵，有的精液在蜂王输卵管内变质导致蜂王死亡。授精过晚，处女蜂王在核群或框式贮王笼内时间较长，影响核群与框式贮王笼的使用效率。

2.处女蜂王的麻醉

麻醉蜂王时先让蜂王爬入诱入管内，再将麻醉管与其对接，待蜂王退入麻醉管后，及时将通气活塞推入，让蜂王腹部露出3～4 节为止。然后安装到授精仪底座上的固定器上，开启CO2钢瓶阀门，从洗瓶中可以观察到CO2流量，通过调节阀门以每秒钟流出约5 个气泡为宜，麻醉时间30 秒左右，处女蜂王进入昏迷状态，直到授精完毕，方可解除麻醉。

3.人工授精

（1）拉开蜇针腔：蜂王麻醉的同时，调节显微镜的位置及焦距，使处女蜂王的腹部清晰呈现在视野中央。然后移动背腹钩操纵杆，当蜂王腹部停止抽动时，移动腹钩操纵杆，使腹钩钩住腹板，接着在探针的配合下使背钩钩住背板，同时移动背、腹钩操纵杆双向拉动，使背、腹板拉至3～4mm 的距离。调整显微镜焦距，移动背钩操纵杆，使背钩端部“膨大”部分伸到蜂王蜇针鞘基部，并使其嵌入基部的三角缝内。背钩嵌入后，再次移动背、腹钩操纵杆，把背、腹板距离拉至5～6mm（图1）。

图1 打开的蜇针腔

（2）进针注射：蜂王背、腹板拉开后，调整蜂王的角度，使蜂王的纵轴线与注射器纵轴平行，其纵轴线与垂直线的夹角30°左右。调节显微镜至蜇针腔清晰，此时可以看到蜇针腔中央靠近蜇针鞘基部有一皱褶开口，该开口就是阴道口。看到阴道口后，移动注射器，排除授精针头尖部的保护液和气泡，调节纵

向导轨使针尖接近阴道口，左手将阴道探针插入阴道，并向蜂王腹面靠拢。使探针压住阴道瓣突，并使阴道口扩张，这时右手调节纵向导轨使针尖沿着探针的背部徐徐进入阴道，直至中输卵管，取出探针，当进针深度达到约1.8mm 时，进针略感受到阻力，阴道口有下陷迹象时，停止进针，然后将授精针头稍退出一点，开始注射精液。如果在授精针头达到这个深度之前，其周围的软组织开始随着移动，表明针头很可能插入到阴道旁边的瓣突或者误进入侧囊，应该立即退出，再次进针。在一切顺利进行时，慢慢将精液注入。如果授精针头内的精液不移动，同时，精液与生理液之间的气泡呈被压缩状态时，则表明针头没有进入输卵管内，需要重新调整进针。蜂王背部和腹部之间的中线必须与腹钩和背钩间的中线完全一致，注射器也必须准确地直线推进。如果蜂王被正确固定时，蜇针腔底部所呈现的三角形阴道瓣褶是左右对称的。如果这些步骤都能正确进行，授精针头会比较容易推进入中输卵管内。一次性授精通常注射8μl 精液；二次性授精每次各注射4～5μl 精液。第一次与第二次授精间隔时间为24～48 小时。注精完毕，稍待10～15 秒后退出授精针头，卸下麻醉管，小心退出蜂王，给蜂王作上标记，待苏醒后送回原核群（图2、图3、图4、图5）。

图2 探针辅助进针的授精过程（引自Ruttner，1976）

图3 授精进针

图4 注射精液

图5 授精蜂王点标记

（3）解剖观察授精结果：初次进行人工授精的技术人员，很想尽早了解一下操作结果。解剖观察授精蜂王的方法是：首先用昆虫针剌穿蜂王的胸部固定到蜡盘上，用手术剪刀剪去翅和足，然后沿着蜂王腹部背板的中线从第6 节向前剪开，直至剪到第二节，在第二节处向两边各剪一刀，末节背板由前向后剪开。在解剖时剪刀的尖部向上挑，以免剪破内脏。用6 根昆虫针把剪开的背板向两边的蜡盘上固定，然后用比较尖的镊子将蜜囊、肠道及毒腺拉出，调整体视显微镜焦距至清晰，此时在视野中可以看到蜂王的两个侧输卵管均匀充满精液，膨大为两个圆球状，说明授精成功。如果蜂王的两个侧输卵管膨胀大小不一，说明进针偏位，或进针过深，针尖进入一侧输卵管内；如果侧输卵管呈线状只有少量精液或内有气泡，均视为授精失败（图6、图7、图8）。

图6 蜂王生殖系统解剖

图7 授精成功的蜂王

图8 蜂王授精失败，双侧输卵管精液量不一致且右侧输卵管中有气泡

（4）操作人员基本要求：在授精操作过程中，要求操作稳、准、轻，以免背腹钩和针头损伤蜂王；熟练了解体视显微镜、授精仪的各部件性能，要求在双眼不离开目镜的情况下，双手能操作自如；每只蜂王从麻醉至授精结束要求控制在5 分钟以内，熟练者大约在1～2 分钟左右。蜂王的背腹板一经打开，必须及时进针注射，以免阴道口干燥造成进针困难。再之，背腹板长时间打开也会增加污染的机会。