鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用
2021-03-04贺欣薇曾茂芹刘妍罕张扬子温贵兰程振涛
张 飘,贺欣薇,杨 霞,曾茂芹,刘妍罕,张扬子,杨 颖,3,温贵兰,3,程振涛,3,文 明,3,*
(1.贵州大学 动物科学学院,贵州 贵阳 550025;2.贵州省畜牧兽医研究所,贵州 贵阳 550025;3.贵州省动物生物制品工程技术研究中心,贵州 贵阳 550025)
核因子κB(nuclear factor-kappa B ,NF-κB)是在1986年由Ranjan Sen等人在鼠B淋巴细胞中发现并将其命名[1],随着对该因子的深入研究,人们发现NF-κB家族由5种NF-κB/Rel蛋白组成,分别为NF-κB1(p50)、NF-κB2(p52)、RelA(p65)、RelB和c-Rel,几乎所有细胞中均有表达[2]。NF-κB信号通路是已知的炎症发展的主要通路[3]。NF-κB是免疫细胞的激活、细胞周期调控、细胞分化增殖凋亡中的重要转录因子[4],同时也是Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)信号通路的下游信号分子,在调控炎症因子转录中占有主要地位[5],最新的研究表明,其还与海马神经元损伤[6]及癫痫[7]有关。当细胞处于健康或未受到外界刺激时,NF-κB的p65亚基与κB抑制蛋白-α(IκB-α)会结合在一起,从而覆盖NF-κB1核蛋白定位信号,使NF-κB1以失活状态存在于胞质中,但当细胞受到外界中某些细胞因子、细菌、病毒感染及内毒素等刺激时[8-10],就会使IκB-α磷酸化后被降解,从而暴露出NF-κB1核蛋白定位信号[11],NF-κB1与IκB-α解离后会迅速转移至细胞核,并与核内DNA特定靶部位结合,启动相关靶基因转录[12],从而引起一系列生理病理过程。以往对NF-κB1基因检测的多为蛋白水平,缺少转录水平的检测方法,而本实验室基于前期在DEV增殖和NF-κB信号通路方面的探索,建立了可为进一步研究 NF-κB 信号通路中NF-κB1基因转录水平检测的荧光定量PCR方法,并对鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblasts,DEF)在感染鸭肠炎病毒(DEV)后NF-κB1基因转录表达量的时间变化情况进行了检测,以此来阐明NF-κB信号通路与DEV增殖的关系。……
