王高明，刘广军，龚向南，蔡 伟，陈伟钢，陈 强，杨传平，申 翼

0 引 言

肺癌具有较高的发病率和病死率，己成为世界范围内严重危害人类健康的恶性肿瘤[1]。肺癌根据不同的病理特征可分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，而非小细胞肺癌所占比例约为85%，其中肺腺癌(lung adenocarcinoma，LUAD)所占比例己超过一半，成为我国发病率最高的肺癌类型[1]。虽然早期筛查、临床诊断和治疗水平不断提升，但LUAD发病率仍然居高不下，患者长期存活率较低[2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA，在细胞周期调控、细胞分化调控及表观遗传调控等众多生命活动中起着重要作用[3]。研究表明，83序列相似成员A -反义核糖核酸1(FAM83A-AS1)作为lncRNA一员，在多种恶性肿瘤的发生、发展及侵袭转移进程中发挥重要作用[4-5]。但lncRNA FAM83A-AS1在LUAD中的功能作用和临床意义尚不清楚。本研究采用实时qReal-time PCR法检测 lncRNA FAM83A-AS1在LUAD组织及正常肺组织中的基因表达水平，进一步探究 lncRNA FAM83A-AS1 的异常表达情况及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2015年1月至12月间徐州市中心医院进行外科手术治疗的80例LUAD患者临床资料。纳入标准：①组织病理学证实为LUAD；②除LUAD外无其他恶性肿瘤；③肿瘤完全切除，切缘阴性，无远处转移；④术前未接受放疗或化疗等。参与研究患者均签署知情同意书，经徐州中心医院医学伦理委员会批准(XZXY-LJ-20200306-003)。标本为原发性LUAD组织及癌旁组织，距肿瘤边缘至少5 cm，经病理学检测无病变。收集后迅速在-80 ℃冰箱冻存待检。收集患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期等临床病理资料。肿瘤临床分期按照AJCC/UICC第8版 TNM标准，具体临床资料见表1。

1.2lncRNA FAM83A-AS1基因表达水平检测取-80 ℃保存标本约50 mg匀浆机匀浆后，按照说明书步骤TRIzol方法分别从肿瘤组织和正常组织中提取总RNA。用Fermentas cDNA第一链合成试剂盒反转录合成cDNA。采用SYBRGreen荧光染料法行实时定量PCR反应。反应体系25 μL，包括2X Real-time PCR Master Mix(SYBR Green) 10 μL，引物1 μL，模板2 μL，加双蒸水至25 μL。首先95 ℃下进行10 min；然后40个循环在92 ℃下进行15 s；最后60 ℃下进行1min。引物序列如下:lncRNA FAM83A-AS1,5′ -CCCCAGAGCACTTCCTTAGC-3′(正向)和5′ -CAGGGCCGTCTGTGTTTACT-3′(反向);β-actin，5′-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3′(正向)和5′ -CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3′(反向)。lncRNA FAM83A-AS1基因的定量分析采用相对定量法,利用监测得到的Ct值和计算得到的扩增效率，以β-actin为参照，计算待测基因mRNA相对表达量。

2 结 果

2.1 lncRNA FAM83A-AS1在LUAD、正常肺组织中的表达80例LUAD标本中lncRNA FAM83A-AS1基因表达上调，明显高于正常肺组织中的表达水平，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。提示lncRNA FAM83A-AS1在LUAD发生中起着重要作用。

图1 qRT- PCR 检测lncRNA FAM83A-AS1在LUAD与肺正常组织中表达的情况Figure 1 Expressions oflncRNA FAM83A-AS1 in LUAD tissues and the non-tumor specimens by performing Real-time PCR

2.2LUAD中lncRNA FAM83A-AS1表达水平与患者临床病理特征的关系LUAD标本中lncRNA FAM83A-AS1基因表达的中位数为4.46。将80例LUAD患者分为低表达组(<4.46，n=40)和lncRNA FAM83A-AS1高表达组(≥4.46，n=40))。lncRNA FAM83A-AS1的表达与肿瘤大小、淋巴结转移情况和临床TNM分期有关(P<0.05)，但与年龄、性别及肿瘤分化程度等因素无关(P>0.05)，见表1。提示lncRNA FAM83A-AS1在LUAD的临床进展起着重要作用。

表1 lncRNA FAM83A-AS1在LUAD患者组织中表达与临床病理特征的关系(n)Table 1 Correlation betweenlncRNA FAM83A-AS1 expression and clinicopathological features in LUAD patients (n)

2.3LUAD中lncRNA FAM83A-AS1的表达水平与患者预后的关系Kaplan-Meier分析结果显示，lncRNA FAM83A-AS1水平较高的患者总生存期较短(P<0.05)，见图2。Cox回归分析结果显示，lncRNA FAM83A-AS1基因表达水平为肺癌预后的危险因素，高表达提示LUAD患者临床预后不佳，见表2。

图2 lncRNA FAM83A-AS1低表达组与高表达组LUAD患者的生存曲线Figure 2 Kaplan-Meier curves of overall survival for LUAD patients with high/low lncRNA FAM83A-AS1 expression

表2 LUAD患者总体生存率的单因素和多因素分析Table 2 Univariate and multivariate analyses of factors associated with overall survival in LUAD patients

3 讨 论

肺癌是世界范围内癌症相关死亡的常见原因，每年180万人被诊断为肺癌，且每年可导致约160万人死亡。肺腺癌作为肺癌的主要病理类型，占肺癌病例的40%以上，且发病率及病死率呈逐年上升的趋势[6]。虽然在外科手术、放化疗、靶向以及肿瘤免疫等方面治疗水平显著提高，但LUAD的早期临床症状隐匿、肿瘤进展迅速、缺乏高效的筛查手段，且容易复发和转移等特点，肺腺癌的整体治愈率和生存率仍然很低，其5年生存率仍不足20%。这可能与早期诊断标志物的缺乏有关[1]。因此，LUAD的早期诊断和预后预测对于临床治疗非常必要。

lncRNA是一类转录本长度大于200nt，不编码蛋白的 RNA 分子。LncRNA 大多位于细胞核或细胞质中，多由 RNA 聚合酶Ⅱ转录，LncRNA 虽不能够编码蛋白，但却因其具有独特的空间结构和对DNA、蛋白质的双向亲和力，在基因表达的过程中发挥着重要的作用[7-9]。LncRNA 对人类基因表达的调控有多种方式，其中70%的基因表达都受到 lncRNA 的调控，其调控方式的丰富性和多样性也决定了 lncRNA 在个体发育及疾病进展中的重要性[10-12]。LncRNA可以从表观遗传学水平、转录水平以及转录后水平对基因表达水平进行调控，调控方式包括信号传导、蛋白诱饵、分子向导及支架等，从而广泛参与细胞的增殖、凋亡、运动等生命活动[13-15]。近年来随着lncRNA在肿瘤领域的研究越来越深入，相关 lncRNA 参与基因表达的调控，促进或抑制肿瘤的发生[16-18]、发展。因此，lncRNA有希望成为新型的肿瘤标志物或肿瘤防治的重要靶点。

lncRNA FAM83A-AS1是lncRNA的一员，位于8号染色体长臂[9-10]。He和Yu[4]研究发现lncRNA FAM83A- as1通过与NOP58结合，增强FAM83A mRNA的稳定性，进而促进肝癌的进展。Shi等[5]报道lncRNA FAM83A- as1上调FAM38A蛋白表达，诱导ERK磷酸化，从而促进肺癌细胞增殖和侵袭。同时通过细胞水平验证敲低lncRNA FAM83A-AS1基因能够明显抑制肝癌、肺癌等细胞的增长并诱导细胞周期阻滞。以上研究表明lncRNA FAM83A-AS1在肿瘤领域的研究有重要价值，而其在LUAD的作用及机制较少报道。Xiao等[9]研究发现lncRNAFAM83A-AS1通过调节miR-150-5p/MMP14通路增强LUAD细胞增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化，在体内能够促进肿瘤生长。得出结论认为FAM83A-AS1/miR-150-5p/MMP14轴调控LUAD进展。Xiao等[9]从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)数据库中检索185例转移性LUAD和217例非转移性LAUD样本的mRNA和lncRNA表达谱,发现FAM83A- as1的表达与转移性LUAD患者的总生存时间显著相关。

虽然lncRNA FAM83A-AS1在LUAD中的生物学功能及其机制尚在研究探索中。但在临床研究中，我们发现lncRNAFAM83A-AS1在LUAD组织中表达上调，且与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期密切相关，证实lncRNA FAM83A-AS1在LUAD的发生、发展中起积极的调节作用。此外，lncRNAFAM83A-AS1高表达与不良预后呈正相关，突出了lncRNA FAM83A-AS1在LUAD预后方面的重要临床应用。

这些结果都提示了lncRNA FAM83A-AS1可能在LUAD的发生和发展过程中起到肿瘤启动子的作用，是LUAD恶性程度的不良预示指标，并且是独立的不良预后因素，并有可能成为该肿瘤新的预后生物标志物。鉴于lncRNA FAM83A-AS1在LUAD中的重要作用和高度研究价值，尚需大样本、多中心的临床实验进一步证实我们的结论，而且lncRNA FAM83A-AS1在LUAD中作用的功能测定尚未进行，需进一步的基础研究来阐述相关机制。