高朋真

(安阳市中心血站，河南 安阳 455000)

Rh血型系统妇女妊娠、输血治疗中可能会引起新生儿溶血病、自免溶贫及免疫性输血反应等临床症状[1]，始终是人们临床输血重点关注的血型系统。对献血者正确地进行RhD血型鉴定，可以巩固稀有血型献血者队伍、减少Rh血型系统同种免疫和输血反应的发生，保障临床用血的需求与安全[2-3]。现将安阳地区2013年1月至2019年12月RhD阴性献血者1 412例抗原分型情况、不规则抗体检测情况、人口统计学情况进行初步的分析研究，报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象2013年1月至2019年12月安阳地区无偿献血人群共计301 145例，初筛RhD阴性献血者1 476例，其中确认RhD阴性献血者1 412例。

1.2 试剂与仪器KA-2200离心机(湖南湘仪)；恒温水浴箱(湖南湘仪)；IgM抗-D(国械注准20163402337)、抗-C(国械注准20173400644)、抗-c(国械注准20173400634)、抗-E(国械注准20173400635)、抗-e(国械注准20173400621)、抗-M(科研用)、抗-N(科研用)，IgG抗-D(科研用)、抗体筛选细胞(国械注准20163402229)、普细胞(科研用)、抗球蛋白试剂IgG+C3d(国械注准20153401144)均来自上海血液生物医药有限公司；抗D(IgM+IgG)(英国Millipore公司，国食药监械(进)字2014第340433号)；凝聚胺试剂(台湾贝索生物技术公司，国械注准20163400841)；乙醚(安徽金邦医药)。

1.3 Rh阴性筛选与确认试验

1.3.1初筛试验 检验科采用微量板法对所有无偿献血者标本进行初筛检测，标本结果为阴性者送血研室做确认实验。

1.3.2确认试验 初筛阴性样本，血研室使用1支IgM抗-D、1支IgG抗-D和2支不同批号的IgM+IgG抗-D试剂，采用凝聚胺法进行确认。如果试管均不凝集判为阴性，若出现的凝集度较弱(±～2+)或部分试管弱凝集则判为Dv型。

1.4 Rh抗原分型试验采用试管法，使用单克隆IgM-C、c、E、e试剂进行表型鉴定。

1.5 不规则抗体筛选与鉴定按抗体筛选红细胞试剂盒说明书要求，用凝聚胺方法进行抗体筛查；筛查阳性标本按普细胞试剂盒说明书要求，用间接抗人球蛋白法进行抗体特异性鉴定。

1.6 Del型筛查方法按照《全国临床检验操作规程(4版)》[4]“乙醚放散法”步骤，进行放散试验。

1.7 信息来源在唐山启奥血液管理信息化系统中查询RhD阴性献血者的“ABO血型”“性别”“籍贯”等信息，将1 412例献血者逐个进行登记。

1.8 统计学方法采用文献方法计算Hardy-Weinberg吻合度[5]；采用软件SPSS 19.0对列表数据进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Rh阴性试验确认情况301 145例献血者男女比例为200 207/100 938，检出1 476例为RhD初筛阴性，其中1 412例为RhD确认实验阴性，献血人群中RhD阴性率为0.47%(1 412/301 145)；检出Dv型3例，Del型61例。

2.2 Rh阴性献血者同种抗体分布情况1 412例RhD确认实验阴性献血者中，检出抗-D抗体9例，全部为女性；抗-E抗体1例，全部为男性；IgM型抗-M抗体2例，男女比例为1∶1；冷自身抗体4例，男女比例为1∶3。男女RhD阴性献血者不规则抗体检出率比较，差异有统计学意义(χ2=16.355，P<0.001)。见表1。

表1 RhD阴性献血者中检出不规则抗体情况(n)

2.3 RhD阴性献血者抗原表型分布及Hardy-Weinberg吻合度情况1 412例RhD阴性献血者的C、c、E、e 4种表型抗原的基因频率e最高0.974 7，其次为c>C>E；表型以ccdee为最高0.565 9(799/1 412)，其次为Ccdee>ccdEe>CCdee>CcdEe>CCdEe，未发现CCdEE、ccdEE、CcdEE表型。见表2。

表2 RhD阴性献血者基因型频率及Hardy-Weinberg吻合度

2.4 RhD阴性献血者人口统计学分布情况1 412例RhD阴性献血者不同ABO血型分布情况、不同性别分布情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)；1 412例RhD阴性献血者不同籍贯分布情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 1 412例RhD阴性献血者人口统计学分布特征

3 讨论

Rh血型系统主要有D、C、c、E、e 5种抗原，其中D抗原是最重要、最具免疫原性的抗原，在临床实践中具有重要意义[6]。在我国，汉族人群中RhD阴性人口占汉族总人口的2%～5%[7]，所以RhD阴性血又称“熊猫血”。本研究共301 145例样本，检出RhD阴性献血者1 412例，阴性率为0.47%(1 412/301 145)，说明安阳地区RhD阴性人群分布与全国平均水平大体一致。但通过籍贯比较安阳市区及所属县(市)之间献血者中RhD阴性分布有差异，其中滑县RhD阴性占比高于其他地区及全市总体水平，可能与当地民族构成有关。

在检验科送检的1 476例初筛RhD阴性献血者中检出Dv型3例(本研究因未做遗传学基因分型无法进一步准确分类)，检出Del型61例(通过吸收放散实验才能检测到D抗原的，统称为Del型)，占初筛RhD阴性的4.1%，低于张志梅等[8]报道的我国汉族RhD阴性人群中24%的比例。在临床实践中由于Dv型个体和Del型个体仍存在一定的免疫原性[9-10]，且我国各级各类采供血机构均未对Del型进行区分，将其一律视为RhD阴性血供应临床，对于未妊娠女性患者在临床救治中输注该类型血液有产生抗-D特异性抗体的风险。所以，对于有特殊需求的患者，应提供更加精准的输血服务，开展献血者Dv型和Del型筛选，能有效避免此类风险发生，存在一定的临床意义。在采供血工作中，对于存在特异性抗体的血液一般将血浆做报废处理，红细胞洗涤后供应临床，从而避免血液浪费，保证临床用血的效果与安全。

本研究显示，安阳地区Rh抗原D、C、c、E、e的表型及基因型频率结果与西安地区、徐州地区、湖北地区[11-13]报道的RhD阴性表型分布结果一致。通过对安阳地区RhD阴性献血者人类遗传学及基因型分布的调查分析，进一步补充了该地区RhD阴性献血者的相关数据，为计划采血、合理调配血液、临床患者配血和减少再次输血困难的发生提供了有力的数据支持。

综上所述，详细掌握安阳地区RhD阴性献血者在性别、籍贯、ABO血型等方面的分布情况，在Rh抗原表型及基因型方面的分布特征，对预判安阳地区RhD阴性血的临床需求，合理安排血液库存，精准输血，避免血液浪费或RhD阴性血液供应不足等具有积极的现实意义。