蓝秀，李伟文，孙蕾，黎媛，赵嘉璐

温州医科大学附属第五医院 呼吸科，浙江 丽水 323000

据报道，肺癌年发病例数高达182万以上，每年约有160万例肺癌患者死亡[1]，其中非小细胞肺癌占肺癌发病总数的85%，且以中晚期肺癌为主，5年存活率也小于15%[2-3]。研究发现多种药物不仅能诱发肿瘤细胞死亡，还能促进濒死细胞释放免疫原性，促使细胞发生免疫原性凋亡，即为免疫原性细胞死亡（immunogenic cell death，ICD）。探索有效刺激的方法和途径已是肿瘤免疫治疗的热点话题[4-6]。IGFBP-4是细胞内最小的胰岛素样生长因子结合蛋白（insulin-like grouth factor binding protein，IGFBPs），可分泌至细胞外，发挥生物学功能，研究表明肺癌组织中IGFBP-4低表达促使细胞增殖、迁移，IGFBP-4缺乏是肺癌不良预后的重要原因[7-8]，然而，IGFBP-4对ICD的影响及机制仍未明确。本研究重点关注外源性IGFBP-4对ICD的影响，并初步探讨其可能机制。

1 材料和方法

1.1 材料 重组人IGFBP-4 蛋白（批号：804-GB-025，纯度≥97%），购自美国R&D Systems公司，N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC，批号：ST1546）、ROS检测试剂盒（批号：S0033）、总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检测试剂盒（WST-8法，批号：S0101）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒（批号：S0131）购自上海碧云天生物技术有限公司。p38 siRNA质粒（sc-29433）、磷酸化（p）-p38抗体（sc-166182）、p38抗体（sc-81621）、Actin抗体（sc-8432）购自圣克鲁斯生物技术（上海）有限公司。Calreticulin抗体购自英国Abcam公司，高迁移率族蛋白1（high mobility group protein 1，HMGB1）ELISA试剂盒购自Arigo Biolaboratories公司（中国台湾），A549肺癌细胞购自中国医学科学院细胞库。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与传代：用10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 μg/mL链霉素的DMEM杜尔伯科改良伊格尔培养基培养，将A549细胞接种于培养皿后，置入37 ℃、5% CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。隔日更换1次培养基，待细胞融合大于80%时传代培养。……