于庆贺，曲戎梅，张国炜，李鑫，仇显帅，欧阳钧，戴景兴，闵少雄

1.南方医科大学珠江医院脊柱外科，广州 510280；2.南方医科大学基础医学院解剖教研室暨广东省医学生物力学重点实验，广州510515

关节软骨是组成活动关节面的一种有弹性的负重组织，主要功能是承受力学负荷和润滑作用。软骨损伤的修复是临床难题，由于缺乏血供，软骨的自身修复能力极为有限[1]。近年来国内外学者针对软骨再生进行一系列研究，研发多种治疗方式，如自体软骨细胞移植，骨髓刺激，基质诱导自体软骨细胞移植等，但在并发症、治疗效果等方面存在缺陷[2～5]。体外构建工程化软骨属于软骨再生研究热点，其诱导种子细胞如间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）分化为软骨细胞，植入受损关节使患者症状缓解[6～8]。胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）是细胞增殖，代谢和分化培养基中最重要的补充剂，但许多报道表明软骨诱导培养基中使用其他种类血清如牛血清，或使用血清替代物如胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠溶液（ITS），抑或使用较低水平的FBS可以产生更高水平的软骨细胞标志物[9～12]。转化生长因子3（TGF-β3）是最常见的用于软骨诱导分化的生长因子，多数实验采用10 ng/ml的终浓度[13,14]，但有些实验使用了更低浓度的TGF-β3[15]。本实验主要比较添加常规浓度FBS（10%）和ITS（胰岛素10μg/L、5.5μg/L转铁蛋白、0.67μg/L亚硒酸钠），以及高浓度和低浓度TGF-β3（10 ng/ml vs 1 ng/ml）的软骨诱导培养基体外诱导MSCs成软骨分化的效果。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 人脂肪干细胞的分离和扩增 在超净台内用眼科剪将人脂肪组织剪……