田青右，朱园飞，常豪，于琳，邓强

复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系, 教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室，上海 200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是一类有包膜的小型DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科[1]。成熟的HBV含有约3.2 kb的松弛环状DNA(relaxed circular DNA, rcDNA)，负链DNA 5′端共价连接病毒多聚酶(polymerase，Pol)。在病毒感染的肝细胞核内，rcDNA修复为共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)，是HBV转录复制的原始模板[2-4]。以cccDNA为模板转录的前基因组RNA(pregenomic RNA, pgRNA)转运至细胞浆被核衣壳包裹，通过Pol反转录生成负链DNA，并合成不完全的正链DNA；部分双链rcDNA通过成熟的核衣壳颗粒再次转运至细胞核，完成HBV的细胞内复制周期[5]。另一方面, HBV核衣壳颗粒通过内体分选转运复合体机制，经由内体多泡体结构完成包膜化和出芽。HBV已知的天然宿主仅限于人和黑猩猩，钠牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurcholate cotransport peptide, NTCP)被证明是HBV高亲和力受体[6-8]，这极大地促进了研究者对HBV从头感染的研究。然而，HBV/NTCP感染体系依赖较高的感染复数，病毒感染和扩增效率较低，病毒粒子表面抗原与受体结合后的细胞进入机制仍需要深入研究。

重组病毒复制子通常在病毒基因组或亚基因组中插入外源报告基因，使其能够支持重组病毒进行功能性复制，具有可检测性和量化特征，如在丙型肝炎病毒、新型冠状病毒[9-13]RNA复制子中引入荧光素酶或荧光蛋白表达基因等，是病毒学体外研究的重要工具。值得注意的是，HBV 3.2 kb基因组高度压缩，4个主要阅读框相互重叠，每一个碱基都具有编码功能和潜在的顺式调控功能，因此HBV基因组难以容纳外源基因，构建重组复制子具有较大的挑战性。……