王艳婷 金学民 李晓华 赵朝霞

1河南省人民医院眼科 河南省立眼科医院 河南省眼科研究所，郑州 450003；2郑州大学第一附属医院眼科 450052

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是一种以视网膜表面和玻璃体腔内形成致密纤维膜，继而引起视网膜脱落的严重疾病[1-2]。研究表明，视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞的上皮-间质转化(epithelial -mesenchymal transition，EMT)是PVR发生的重要因素[3-4]。转化生长因子β2(transforming growth factor-β2，TGF-β2)可通过Smad、磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)等多种信号通路诱导RPE细胞发生EMT[5-6]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类广泛存在于人体组织中的非编码RNA，可以靶向调控下游靶基因的转录和翻译，从而发挥生物学功能[7]。微小RNA-155(microRNA-155，miR-155)属于miRNA家族成员，研究证实其在干眼、葡萄膜炎等多种眼科疾病中发挥重要作用[8]。同时有研究证实，miR-155在PVR患者RPE细胞中呈高表达[9]。目前miR-155在TGF-β2诱导RPE细胞EMT过程中发挥的作用尚不明确。本研究探讨miR-155在TGF-β2诱导RPE细胞EMT过程中的作用，为PVR发生的分子机制提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人源性RPE细胞系ARPE-19(中国科学院上海细胞库)；含与不含青链霉素混合液的DMEM培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、Transwell小室(上海碧云天生物技术有限公司)；TGF-β2(美国Humanzyme公司)；miR-155抑制剂和miR-155阴性对照序列由上海吉玛基因公司合成；Trizol试剂、Lipofectamine 2000、实时荧光定量PCR试剂盒(美国Sigma公司)；兔抗人磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten gene，PTEN)一抗(51-2400)、兔抗人PI3K一抗(PA5-83748)、兔抗人Akt一抗(44-609G)、兔抗人p-Akt一抗(44-621G)、鼠抗人钙黏蛋白E(E-cadherin，E-cad)一抗(33-4000)、鼠抗人平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)一抗(MA1-80729)、鼠抗人波形蛋白(vimentin)一抗(MA5-11883)(美国Invitrogen公司)；兔抗人纤连蛋白1(fibronectin 1，FN-1)一抗(ab2413)、兔抗人闭锁小带蛋白1(zonula occludens protein 1，ZO-1)一抗(ab96587)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)(ab8245)(英国Abcam公司)；鼠抗人F-肌动蛋白(F-actin)一抗(14395-1-AP，美国Proteintech公司)；……