BSA 荧光探针对醋氯芬酸含量的测定及相互作用的研究*
2021-02-26王艳妮马红燕王文山
王艳妮,马红燕,王文山
(延安大学 化学与化工学院 陕西省反应工程重点实验室,陕西 延安 716000)
醋氯芬酸(Aceclofenac,ACF)是目前常用的口服非甾体抗炎药(NSAID)之一,具有显著的抗炎、镇痛作用,在治疗术后疼痛,类风湿性关节炎和骨关节炎方面有明显的疗效[1],与其他非甾体抗炎药物相比,ACF 具有抗炎作用好、胃肠道不良反应发生率低等优点。为了保证ACF 在临床上的安全性和有效性,避免长期服用导致含量过高而引起副反应,因此,建立一种快速、简单的测定方法很重要。
目前,国内对ACF 含量的测定主要采用高效液相色谱法,随着技术的成熟,电化学方法[2]、气相色谱法[3]、紫外分光光度法[4,5]也相继出现,但荧光法测定却鲜少报道。牛血清白蛋白(BSA)是动物血浆中含量最丰富的功能蛋白,与人血清白蛋白(HSA)有高度的相似性和同源性,因此,常被用来研究药物分子和血清蛋白的相互作用[6]。实验发现ACF 对BSA的内源性荧光有线性猝灭作用,基于此,建立了测定ACF 的新方法。进一步探讨了二者的作用机理,为后续研究ACF 在人体的运输过程提供了数据参考。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
日本日立F-4500 荧光光度计;美国安捷伦8453紫外-可见分光光度计。
3.35×10-3g·mL-1BSA 标准溶液 准确称取1.6750g 牛血清白蛋白标准品,超纯水溶解定容至500mL 容量瓶;
3.5×10-4g·mL-1ACF 标准溶液 准确称取0.0350g 醋氯芬酸标准品,用热的超纯水溶解后定容至100mL 容量瓶,使用时稀释至所需浓度;
3.0×10-3mol·L-1HCl 溶液。
所用试剂均为分析纯,配置好后于冰箱4℃保存,水为UP 超纯水(实验室自制)。
1.2 实验方法
25℃下,于5 支25mL 比色管中分别加入4.00mL的HCl 溶液和1.00mL 的BSA 标准液,一份做试剂空白,其余比色管加入不同浓度梯度的ACF 溶液,每次增加浓度为2.8×10-7g·mL-1。……
