张 驰,卢 山

(1.南京师范大学生命科学学院,江苏 南京 210023) (2.南京师范大学江苏省分子医学生物技术重点实验室,江苏 南京 210023)

2020年,美国男性新增癌症病例中,前列腺癌(prostate cancer,PCa)以21%的发病率跃居发病率首位,死亡率高达10%,仅次于肺癌和支气管癌[1]. 虽然前列腺癌高发病率主要集中在中南美洲、西欧和北欧以及撒哈拉以南非洲地区[2],但近年来我国前列腺癌发病率也呈明显上升趋势,这和国内高蛋白、高脂肪饮食结构倾向、家族病史影响以及平均寿命延长等密切相关[3]. 寻找和解析影响前列腺癌发生发展的新分子靶标和分子机制迫在眉睫.

USP13是泛素特异性蛋白酶(ubiquitin specific protease,USP)超家族中的一员,其依赖Cys345的催化活性逆转泛素化过程,水解多聚泛素链羧基端的肽键或酯键将泛素链从底物上分离[4]. USP13从N端到C端依次为ND(N-terminal domain)、ZnF(zinc finger domain)、C box(catalytic domain)、UBA1/2(ubiquitin associated domain)和H box(catalytic domain)结构域[5-6]. ZnF结构域能与游离泛素链的C末端结合,激活酶本身的去泛素化活性[7]. 两个串联的UBA1/2结构域是泛素特异性受体. 据文献报道,USP13在不同肿瘤中发挥抑癌或促癌的不同作用[8-11]. USP13在前列腺癌中的作用及调控机理尚未见文献报道. 本研究首先在前列腺癌细胞PC-3和DU145中转染pcDNA3.0-USP13-HA质粒,利用CCK-8法、克隆形成、划痕及Transwell迁移实验分别检测USP13对细胞增殖、克隆和迁移能力的影响;然后,在上述两种细胞中过表达或敲低USP13,采用逆转录PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(western blotting)技术分别检测USP13对STAT1转录水平和蛋白水平的调控;同时,在DU145细胞中,过表达或敲低USP13进行Co-IP实验,检测STAT1泛素化水平的变化. 实验结果发现USP13能够通过……