梁伟达 曾劲伟 薛家权 林粤 陈小龙

地中海贫血（简称地贫）是一种常染色体隐形遗传疾病，该病会导致患者血红蛋白（Hemoglobin，HB）表达异常［1］。α 地贫源于α 珠蛋白基因突变，在我国南方特别是广东广西两省携带者众多，广东人群的α 地贫基因携带率约为8.5%［2⁃3］，由于其发病率高，影响大［4］，目前我国把它作为一个产前筛查的常规项目。常规检测方法只能检测到常见的基因型，稀有基因型很容易漏诊［5］，给产前筛查带来挑战。本研究对一个家庭中α 地贫基因一种新型罕见突变进行鉴别，并对该家庭地贫基因进行遗传分析。

1 资料与方法

1.1 资料

先证者男性，27 岁，贫血貌，患者因备孕行地贫基因分型检测，使用PCR⁃反向点杂交法（Polymerase Chain Reaction⁃Reverse Dot Blot，PCR⁃RDB）［6］基因分型检测结果为⁃⁃SEA纯合子，与血常规和血红蛋白电泳表型不符。为明确其基因型及遗传特性，同时对其父亲和母亲地贫基因进行分析。

1.2 血红蛋白电泳

采用法国CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING全自动毛细管电泳仪进行分析，使用仪器配套的试剂严格按照标准操作规范完成实验。

1.3 PCR⁃RDB 法检测地贫基因分型

按照深圳亚能生物技术有限公司提供的试剂盒说明书进行操作。先提取DNA，然后对DNA 进行PCR 扩增，扩增条件：50℃15 min，96℃15 min，62℃50 s，72℃75 s，然后进入循环（97℃45 s，59℃50 s，72℃75 s）35 次，最后72℃延伸5 min。扩增产物滴在包被有基因突变特异性探针膜上进行杂交，观察检测膜条上各位点信号的有无，判断待检样品基因型。

1.4 α 地贫基因测序

使用Sanger 法测序，由深圳亚能生物技术有限公司提供基因测序服务。

1.5 统计与分析

地贫基因参考序列（NG_000006.1）下载自美国国立生物技术信息中心（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene），使用ClustalX2 对测序结果进行序列比对及突变分析。……