猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定
2021-02-16刘运超杨苏珍陈玉梅王聚财尚延丽陈维聪张改平
刘运超,杨苏珍,陈玉梅,王聚财,尚延丽,魏 蔷,陈维聪,冯 华,张改平
(1. 河南省农业科学院 动物免疫学实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002;2. 郑州大学 生命科学学院,河南 郑州 450001)
猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)于1965年首次在德国发现,是导致猪繁殖失败的主要病原体之一,临床上以怀孕母猪发生死胎、木乃伊化和发情延迟为主要特征[1-2],给全球养猪业造成巨大经济损失[3]。我国猪场PPV 检出率高,常与其他繁殖障碍性疾病病原如猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine productive and respiratory syndrome virus,PRRSV)等混合感染,加重了疾病防控难度[4]。
PPV 属于细小病毒科、细小病毒属,是一种单链、无囊膜的DNA 病毒,病毒粒子直径为18~26 nm,呈T=1的二十面体结构[5-6]。PPV 基因组全长约5 000 bp,主要包含2 个开放阅读框(Open reading frame,ORF),其中ORF1 编码非结构蛋白NS1、NS2 和NS3,主要参与病毒DNA 复制和基因表达调控[7-8];ORF2 编码结构蛋白VP1、VP2 和VP3,主要参与病毒的组装和感染过程,与病毒的附着、进入、定位和病毒粒子组装密切相关[9-10]。PPV 的衣壳结构主要由VP1 和VP2 蛋白组成,比例约为1∶20[11]。VP2 蛋白由VP1 蛋白经剪切去除VP1 蛋白N端的150 个氨基酸形成[12],而VP3 蛋白由VP2 蛋白经剪切水解形成[13]。VP2蛋白是PPV 的主要衣壳蛋白,包含PPV 的血凝(Hemagglutination,HA)活性位点和多个中和性抗原表位,可在体外自组装成病毒样颗粒(Viral-like particles,VLP)结构,诱导中和性抗体产生[14-16]。
中和性单克隆抗体具有特异性强、敏感性高,能够阻断病毒感染等特点,被广泛用于病毒的免疫学检测、免疫保护评价和病毒感染机制研究等领域[17-20]。孙建慧等[21]利用杆状病毒表达的重组PPV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,经……
