蜱媒Dabieshan病毒NP蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立*

2021-02-10艾乐乐朱长强王长军谭伟龙

寄生虫与医学昆虫学报 2021年3期

何婷艾乐乐朱长强胡丹王长军李萌谭伟龙**

(1.南京医科大学附属儿童医院输血科，江苏南京 210000； 2.东部战区疾病预防控制中心，江苏南京 210000)

蜱虫是一类专性吸血的媒介节肢动物，可以传播细菌、病毒、立克次体等多种病原体(Chenetal., 2014)。其中，克里—米亚刚果出血热病毒(CCHFV)(Leblebiciogluetal., 2016)、蜱传脑炎病毒(TBEV)(Lindquistetal., 2008)和发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)(Yuetal., 2011)等对人类具有较高的致病性。Dabieshan病毒和SFTSV、哈特兰德病毒(HRTV)(Mcmullanetal., 2012)同属布尼亚病毒目、白纤病毒科、白蛉病毒属，节段式单股负链RNA病毒。2015年通过高通量测序技术首次发现该病毒(Shietal., 2016)。2016年本课题组通过对舟山地区蜱虫高通量测序及特异性PCR技术发现该地区蜱虫中广泛携带Dabieshan病毒，阳性率高达64.9%(Zhuetal., 2020)。大多数布尼亚病毒NP蛋白能够与RNA结合，协助RNA转录和复制，在病毒的入侵和定植中发挥作用(Fieldsetal., 1993)。本课题组前期发现的Dabieshan病毒NP蛋白(GenBank序列号MN723842.1)，虽然与致病的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) (GenBank序列号YP006504092.1)以及裂谷热病毒(Rift Valley fever virus)(GenBank序列号ABQ2358.1)同属于白蛉病毒属的分支，但其位置上相距较远，同源性只有29.88%和35.00%。相反，与2015年发现的Dabieshan病毒(GenBank序列号KM817733.1)和Yongjia病毒(GenBank序列号AJG39335.1)同源性比较高，分别为100%和55.06%(何婷，2019)。为了明确Dabieshan病毒NP蛋白的生物学功能，解析该病毒的潜在致病性和流行病学特征，实现对舟山地区虫媒病毒的监控和预警，本文以Dabieshan病毒NP蛋白生物信息学分析为基础，成功表达和构建一种以NP蛋白为包被抗原的高特异性和敏感度的间接ELISA方法，后续将对采集地人群动物进行血清学的初步筛查。