邓梦琪 张艳芹 常翔宇 吴 迪 徐春玉 苗劲蔚

(首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科，北京 100006)

卵巢癌(ovarian cancer，OC)是病死率最高的妇科生殖系统恶性肿瘤[1]，其生物学行为特性是起病隐匿、进展迅速、复发及病死率高。由于缺乏早期诊断手段，发病后多在短时间内盆腹腔广泛种植和转移，因此60%的OC在首次就诊已为晚期[2]。

B7同系物3(B7 homolog 3，B7-H3)是2001年发现的协同刺激分子B7家族成员之一，也是重要的免疫检查点[3]。研究[4]显示，与PD-1/PD-L1、CTLA-4主要作用T细胞不同，B7-H3能在降低CD8+T细胞活化的同时抑制自然杀伤细胞的活性，并在细胞增生分化等方面起调控作用。B7-H3在众多恶性肿瘤的细胞增生中发挥重要作用[5-6]，本实验通过慢病毒介导的shRNA干扰技术建立B7-H3敲降的ES-2细胞株，检测B7-H3表达情况并观察敲降组与对照组细胞增生活性改变，为研究以B7-H3为靶点的ES-2细胞株增生机制研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 细胞及主要试剂

CO2细胞培养箱 (美国 Thermo Fisher Scientific公司)、超净细胞工作台 (美国 Thermo Fisher Scientific公司)、微量可调移液枪(法国Glison公司)、eclipse TS100-F倒置光学显微镜(日本NiKon公司)、MULTIFUGE X3R 台式离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司)和precision GP 10型水浴锅(美国Thermo Fisher Scientific公司)、免疫荧光显微镜(日本NiKon公司)、Applied BiosystemsTM7500 实时定量 PCR 仪(美国 Thermo Fisher Scientific公司)、LSR FORTESSA流式细胞仪(美国BD公司)、酶标仪(美国Thermo公司)。

1.2 主要仪器

人卵巢透明细胞癌细胞株(ES-2)购自武汉普诺赛公司。McCoy-s-5-A培养基(北京索莱宝公司)，标准胎牛血清(美国Life公司)、1XPBS溶液(北京 索莱宝公司)、0.25%(质量分数)胰蛋白酶-EDTA溶液(北京索莱宝公司)、Trizol(美国Invitrogen公司)、TIAN Script RT试剂盒(北京天根生化科技有限公司)、 SYBR FAST qPCR试剂盒(美国KAPA Biosystems公司)、 氯仿(北京化学试……