王燕 袁远 吕佳 庞龙 邱波 苏冬莹 关晓莹 乡晓岚 李坚昊

年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年人首要的致盲性眼病[1]。AMD根据临床表现和病理改变的不同分为湿性AMD和干性AMD，其中干性AMD是最常见的临床类型[2]。干性AMD早期以玻璃膜疣为主，晚期可发展至地图样萎缩而严重损害患者视力。干性AMD发病机制复杂，既往研究表明，氧化应激与炎症改变可对视网膜色素上皮(RPE)细胞造成损害，从而导致AMD发生发展[3-5]。另外，很多细胞因子参与RPE细胞的炎症反应，如β淀粉样蛋白(Aβ)、补体因子H(CFH)、C3、C5等[5-7]。由于干性AMD发病机制不明，故迄今尚无有效的治疗方法[3]。

补肾益气活血方——中药制剂为杞黄颗粒(QHG)，是我们医院治疗AMD 的经验方。我们的前期研究发现，QHG对AMD患者有一定的临床疗效，有助于稳定及改善患者的视力和眼底改变[8]，对AMD患者的血清CFH也有一定的上调作用[9]。但该方对RPE细胞的保护作用未知。本课题拟在前期研究基础上探讨QHG对人RPE细胞氧化损伤的保护作用，以及对Aβ及补体替代通路终末产物攻膜复合物(MAC)的影响，以探明其作用机制，为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验对象人RPE细胞系ARPE-19购自ATCC公司，使用含体积分数10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和100 g·L-1链霉素的DMEM/F12完全培养基培养，放置于含体积分数5%CO2、37 ℃恒温恒湿的培养箱中孵育。

1.1.2 实验药物QHG主要成分为丹参、枸杞、褚实子、茺蔚子，由江苏江阴天江药业有限公司提供，药品批号：1612350。

1.1.3 主要试剂及仪器DMEM(美国Hyelon公司)，DMSO(广州威佳科技有限公司)，2.5 g·L-1胰蛋白酶、胎牛血清(美国Gibco公司)，Muse Oxidative stress Kit、Muse Multicaspase Kit(美国Millipore公司)，Aβ和 MAC ELISA试剂盒(武汉纯度生物科技有限公司)，RNA 提取试剂盒(美国 Invitrogen 公司)，qPCR 试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司]。……