李永平 叶新如 王 彬 陈敏氡 刘建汀 朱海生 温庆放

(福建省蔬菜遗传育种重点实验室/福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院蔬菜研究中心/福建省蔬菜工程技术研究中心,福建 福州 350013)

黄秋葵(HibiscusesculentusL.)属于秋葵属,其嫩果可食用,含有丰富的蛋白质、维生素及矿物盐、多糖聚合体等营养物质,是一种具有较高营养价值、保健功能的新型蔬菜[1-2],已成为许多国家运动员的首选蔬菜[3]。

实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)能够精确定量复杂混合物中特定核酸,是定量分析各种目的基因和基因表达量的重要技术手段[4]。影响RT-qPCR分析结果准确性的因素包括RNA质量、内参基因及引物特异性等[5],其中内参基因的稳定性对其结果影响最大。因此,有必要选择表达稳定的内参基因对目标基因表达量进行校正和标准化[6]。然而,内参基因在不同试验要求下表达可能出现差异[7-8],因此根据不同物种和不同试验要求筛选能稳定表达的内参基因对基因定量分析具有重要的意义。

肌动蛋白基因(actin,ACT)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA,18SrRNA)、真核生物延伸因子(elongation factor 1 alpha,EF-1α)、甘油醛-3-磷酸-脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、α-微管蛋白基因(α-tubulin,TUA)和β-微管蛋白基因(β-tubulin,TUB)等看家基因常被作为内参基因[9-11]。目前,国内外关于黄秋葵内参基因的筛选及表达分析鲜有报道,仅王旭等[12]发现,研究黄秋葵查尔酮合成酶基因(chalcone synthase,AeCHS)表达时应选用陆地棉β-actin(FJ560483.1)为内参基因。因此,本研究根据黄秋葵RNA-seq数据库,筛选并验证获得18SrRNA、ACT、EF-1α、TUA、TUB、GAPDH等基因开放阅读框(open reading frame,ORF)序列;以绿白1号的不同组织、不同发育时期果实、叶……