张彐宁 高维娟 周晓红 靳晓飞

(河北中医学院，河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室，石家庄 050091)

脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管病治疗过程中常见的病理损伤，如何减轻该损伤已成为临床及科研领域的研究重点。再灌注导致的病理损伤机制主要为细胞凋亡、氧自由基生成过多、Ca2+超载、自噬等[1-2]。细胞凋亡作为脑缺血后再灌注引发二次损伤的重要作用机制，主要表现形式包括内源性线粒体凋亡途径和外源性死亡受体途径，其中线粒体凋亡通路是再灌注凋亡发生的主要途径[3-4]。凋亡蛋白酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1)是线粒体凋亡通路中连接上下游调控因子的关键中间蛋白，对细胞凋亡调控发挥关键作用[5]。研究发现，在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中，通过药物干预抑制Apaf-1表达可显著抑制细胞凋亡，减轻脑组织损伤[6]。但在细胞水平的相关研究较少，而采用基因沉默靶向抑制Apaf-1表达，准确观察其对脑缺血再灌注线粒体凋亡通路的影响研究更少。本研究采用PC12细胞建立氧糖剥夺/复氧复糖细胞模型，模拟神经细胞体外缺血再灌注损伤环境，靶向抑制Apaf-1蛋白表达，在细胞水平探讨Apaf-1对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响，为脑缺血再灌注损伤的靶向治疗提供新的思路和实验依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1细胞 PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)购自BOSTER公司，经NGF诱导后具有神经元特性。

1.1.2主要试剂与仪器 opti-MEMⅠ培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；脂质体Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)；……