于昊,李曼曼,薛洋,姜志洋,茆达干

(南京农业大学动物科技学院家畜繁殖研究室/动物科学类国家级实验教学示范中心,江苏 南京 210095)

卵巢黄体是成熟卵泡排卵后形成的一个暂时性内分泌腺体,对卵巢周期性调节和妊娠维持具有重要作用。卵泡排卵后,颗粒细胞逐渐分化成大黄体细胞,与卵泡内膜细胞分化成的小黄体细胞一起构成黄体的重要组成部分[1]。分化的颗粒细胞主要分泌孕酮(progesterone,P4)以维持黄体的功能,然而由于某些原因未排卵的颗粒细胞亦会黄素化引起黄体囊肿从而引起繁殖障碍。因此研究颗粒细胞的正常分化对揭示黄体形成的分子机制具有重要意义。

毛喉素(forskolin,FSK)作为腺苷酸环化酶(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的激动剂可增加胞内cAMP浓度[2],激活蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)参与细胞代谢的多种过程[3]。研究表明,FSK可通过PKA下游的cAMP效应元件结合蛋白(cAMP-response element-binding protein,CREB)和Epac1-Rap1信号诱导小鼠巨噬细胞增殖[4];FSK还可以上调未成年大鼠卵泡颗粒细胞雌激素β亚型受体[5],提示FSK有利于颗粒细胞的增殖代谢。Shrestha等[6]发现,FSK诱导的cAMP升高激活了纤维生长因子2并维持牛颗粒细胞的增殖和存活。Bahmanpour等[7]发现,在与颗粒细胞共培养的小鼠胚胎干细胞中加入FSK可以促进胚胎干细胞向生殖样细胞分化;FSK还可以通过减少抗凋亡蛋白加速乳腺癌细胞的凋亡[8]。

鉴于复杂的生物学功能,FSK在细胞培养中广泛应用于促进细胞的增殖、分化或凋亡,而FSK对猪卵泡颗粒细胞分化的分子机制未见详细报道。本试验通过FSK处理体外培养的猪卵泡颗粒细胞,研究其对细胞分化及细胞周期等的影响,为颗粒细胞体外分化模型的建立提供新方法,为研究卵巢卵泡-黄体转化的分子机制提供理论依据。……