展恩玲,盛成旺,陈煜明,唐涛,赵春青*

(1.南京农业大学植物保护学院,江苏 南京 210095;2.湖南省农业科学院植物保护研究所,湖南 长沙 410125)

蛋白指示标签,包括短肽、表位标记、折叠蛋白标记和非色谱标记等,作为一种重要的生物分子研究辅助工具已被广泛应用,并大幅度简化蛋白质的异源重组表达和纯化过程[1-2]。其中,常用的可视化蛋白标签多为荧光蛋白,如绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)和单体红色荧光蛋白(monomeric red fluorescent protein,mRFP)等。荧光蛋白主要用于监测经其标记的靶标蛋白在活细胞或组织内的动态过程[3],其优点在于无需外源性底物和辅助因子即可在长波紫外辐射(ultraviolet,UV)下被激发[4-6]。因此,荧光蛋白均需UV-激发或利用荧光成像技术才能观测到颜色[7]。此外,荧光蛋白的光谱与结构特征相互依赖[5],其成本高且分子质量太大会干扰蛋白的表达[2]。因此,在原核系统中表达重组蛋白时,常用成本较低且分子质量较小的His和GST标签[1]。但这些标签在蛋白表达和纯化过程中无显色特性,造成检测结果后延,操作技术复杂,如需免疫印迹(Western blot)等检测技术,耗时耗力。因此,研发一种新颖并兼具上述优点的可视化蛋白标签来简便蛋白重组表达和纯化进程将尤为必要。

细胞色素b5(cytochrome b5,Cyt-b5)是一类含有辅基原卟啉Ⅸ(血红素,heme)的金属蛋白,在生物体内作为电子转移元件参与多种重要的氧化还原反应[8]。它在红细胞中以可溶蛋白形式存在并介导高铁血红蛋白还原[9],是内质网膜微电子传递链的组成部分[9-10]。……