高润红,郭桂梅,何婷,杜志钊,任金宝,刘成洪,陆瑞菊*

(1.上海市农业科学院生物技术研究所/上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106;2.上海市农业科技服务中心,上海 200335;3.苏州农业职业技术学院,江苏 苏州 215008)

加倍单倍体(doubled haploid,DH)技术是实现纯合最快的方法,已应用在植物育种等研究中[1]。小孢子培养和花药培养是常用的获取单倍体的方法。相对于花药培养,小孢子培养更有优势,去除花药壁的影响,直接对小孢子进行操作,短时间内可以处理更大的群体,从而增加绿苗产量,节省大量资源[2]。在大麦中,通过小孢子培养来产生DH群体是最有效的方法[3]。影响小孢子培养效果的因素很多,包括基因型、供体植株的生长条件、小孢子的发育时期、培养前预处理和培养基成分等[4-6]。其中小孢子适宜的发育时期是单核中晚期,这一时期的小孢子经过逆境处理后去分化,获得细胞全能性,然后在适当的培养条件下分裂发育成胚性愈伤组织,最后形成植株[7]。小孢子的发育阶段可以通过细胞学观察来确定,这对于大批量的试验而言费时费力[8]。因此寻找合适的形态学指标来评判小孢子的发育时期非常必要。

旗叶距是指旗叶与倒二叶的叶耳间距离,可以作为大麦和小麦减数分裂、幼穗大小的一个形态学指标[9-10]。有研究表明,在大麦中不同旗叶距对每穗分离的小孢子产量有非常显著的影响,最佳的收获时期能够将胚性小孢子的产量提高2～4倍[3]。在燕麦中,旗叶距对花药愈伤产量和绿苗再生具有显著的影响[11]。……