杜文龙，傅力行，何健，叶益峰

（纳爱斯集团有限公司，浙江丽水 323000）

水杨酸为植物柳树皮提取物，是一种天然的消炎药，具有杀菌功效；对氯间二甲苯酚是一种低毒性抗菌剂，对多数革兰氏阳性、阴性菌、真菌、霉菌都有杀灭功效，两种成分均可用于生产洗手液中［1］。对于洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的测定，目前使用的测定标准是消毒卫生规范中甲酸、水杨酸和山梨酸含量的测定［2］以及GB 27947-2011 酚类消毒剂卫生要求中对氯间二甲苯酚含量的测定［3］， 两种方法中的液相色谱测定条件不同，要先用一种液相测定条件测定水杨酸含量，再用另一种液相测定条件测定对氯间二甲苯酚含量，操作繁琐，因此研究用一种液相条件同时测定水杨酸和对氯间二甲苯酚两种成分的含量很有必要。

目前对水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的测定主要有高效液相法［2-14］、紫外分光光度法［15］，但是还没有哪一种方法是针对洗手液中同时测定水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的，而紫外分光光度法比高效液相法准确度低。笔者采用高效液相色谱仪同时测定洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚，该方法能很好地分离水杨酸和对氯间二甲苯酚，而且峰型良好，测定结果准确可靠，不需要单独使用两种方法分别测定水杨酸和对氯间二甲苯酚含量［2-3］，节约了时间，减少了试剂仪器损耗，不需要进行繁琐的梯度洗脱［4］。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：LC-20AT 型，配备手动进样阀(20 μL 定量环)和SPD-M20A 型二极管阵列检测器，日本岛津公司。

电子天平：LE204E 型，分度值为0.000 1 g，瑞士梅特勒-托利多集团。

水杨酸：纯度为99.0%，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。

对氯间二甲苯酚：纯度为99.0%，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。

甲醇、磷酸：色谱纯。

实验用水：超纯水。

1.2 仪器工作条件

色谱柱：Shim-pack Scepter C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，日本岛津公司)；检测器：SPD-M20A型二极管阵列检测器；检测波长：280 nm；流量：1.0 mL／min；柱温：室温；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(体积比为70∶30)；进样体积：20 μL。

1.3 对照品溶液配制

水杨酸与对氯间二甲苯酚混合标准储备溶液：称取水杨酸标准品0.2 g 与对氯间二甲苯酚标准品0.1 g 至100 mL 容量瓶中，用流动相溶解定容至标线，混匀。得到水杨酸与对氯间二甲苯酚混合标准储备溶液，浓度分别为2 000、1 000 μg／mL。

水杨酸与对氯间二甲苯酚系列混合标准工作溶 液：分 别 移 取2.00、5.00、10.00、15.00、20.00 mL上述溶液至5 只100 mL 容量瓶中，得到水杨酸质量浓度分别为40、100、200、300、400 μg／mL 与对氯间二甲苯酚质量浓度分别为20、50、100、150、200 μg／mL 的系列混合标准工作溶液。

1.4 样品处理

称取洗手液样品2.5 g，用流动相甲醇-0.1%磷酸水溶液(体积比为70∶30)溶解，并定容至50 mL 容量瓶中，混匀，超声溶解去除气泡后定容。溶液经0.45 μm 有机滤膜过滤，所得滤液按色谱条件1.2 进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，从标准曲线上求出相应的被测物浓度。水杨酸和对氯间二甲苯酚混合标准溶液色谱图见图1。

图1 水杨酸和对氯间二甲苯酚混合标准溶液色谱图

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的确定

从参考文献［2-14］来看，使用C18柱可以分离水杨酸和对氯间二甲苯酚，因此选择C18色谱柱作为分离柱。

消毒卫生规范中甲酸、水杨酸和山梨酸含量的测定液相条件是强酸性条件，对氯间二甲苯酚不出峰、峰型不好或峰值较低；GB 27947 酚类消毒剂卫生要求中对氯间二甲苯酚含量测定的液相色谱条件为中性条件，得到的水杨酸峰型化为双峰，峰型不好。使用多种流动相进行试验，发现要想水杨酸峰型好，必须是在酸性的流动相条件抓，所以对酸性的流动相条件尝试，最终发现流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(70∶30)时，水杨酸和对氯间二甲苯酚均得到很好的分离效果，峰型较好，色谱图见图1。

为方便在测定试验过程中对多个检测波长对比，选出合适的检测波长，故使用SPD-M20A 型二极管阵列检测器。上述两种标准方法中，检测的波长不相同［2-3］，水杨酸的检测波长为280 nm，对氯间二甲苯酚的检测波长为220 nm。当检测波长为220 nm 时，样品中有干扰峰，且峰面积比较大；当检测波长为280 nm 时，无干扰峰，故选择检测波长为280 nm。从诸多参考文献来看，流动相流量均为1.0 mL／min，柱温一般为室温，所以本实验也选择此条件，经试验，水杨酸和对氯间二甲苯酚可以得到有效的分离。

2.2 样品前处理方法的确定

因为样品偏中性，所以要想得到良好的水杨酸色谱峰型，必须要对样品进行酸化处理。实验使用的流动相为酸性溶剂，且洗手液中可能含有难溶解于流动相的物质，如硫等，为避免在流动相运行中难溶解的物质析出，故选择样品前处理方法为使用流动相溶解并定容样品。

2.3 线性关系与检出限

按1.2 色谱条件测定1.3 中配制的水杨酸与对氯间二甲苯酚系列混合标准工作溶液，以质量浓度为横坐标，以其对应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，计算得水杨酸线性方程为y=14 395x-12 168，对氯间二甲苯酚线性方程为y=13 522x-7 538，相关系数均为0.999 9，水杨酸的线性范围为40～400 μg／mL，对氯间二甲苯酚的线性范围为20～200 μg／mL。

按仪器的3 倍信噪比(S／N=3)计算检出限，水杨酸与对氯间二甲苯酚的检出限均为0.1 μg／mL。

2.4 方法对比

选取3 组洗手液样品，分别按照消毒卫生规范中水杨酸含量的测定方法［2］与GB 27947-2011 酚类消毒剂卫生要求中对氯间二甲苯酚含量的测定方法［3］测定水杨酸和对氯间二甲苯酚含量，与本实验方法进行比对，结果见表1。

表1 对比试验结果

从表1 可以看出，3 种方法测得的数据基本一致，说明本方法准确可靠，可以替代标准消毒卫生规范中甲酸、水杨酸和山梨酸含量的测定以及GB 27947-2011 酚类消毒剂卫生要求中对氯间二甲苯酚含量的测定方法。

2.5 精密度试验

按本实验方法测定同一个洗手液样品中水杨酸和对氯间二甲苯酚含量，平行测定5 次，结果见表2。洗手液样品色谱图见图2。

表2 精密度试验结果

从表2 可以看出，水杨酸和对氯间二甲苯酚测定结果的相对标准偏差分别为0.79%，1.39%，说明本方法测得的数据精密度良好。计算得测定结果的平均值分别为0.400%与0.154%，生产的洗手液中添加的水杨酸和对氯间二甲苯酚含量分别为0.40%和0.15%，测定结果与添加量基本一致。

图2 洗手液样本色谱图

2.6 加标回收试验

在已知水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的洗手液中加入不同浓度的水杨酸和对氯间二甲苯酚，按本实验方法测定，进行加标回收试验，结果见表3。由表3 可知，水杨酸的加标回收率为97.9%～99.5%，对氯间二甲苯酚的加标回收率为96.9%～99.8%，说明该方法具有较高的准确度，能准确测定洗手液中的水杨酸和对氯间二甲苯酚含量。

表3 水杨酸回收试验结果

3 结语

建立了高效液相色谱仪同时测定洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的方法。该方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，减少了仪器、试剂损耗，可用于洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的测定。