林秀山 周向东 王才春

(海南医学院第一附属医院呼吸内科，海口 570102)

支气管哮喘是呼吸道常见的慢性疾病，气道阻力增高以及高反应性是其显著特征[1-2]。越来越多的循证医学证据表明，哮喘发作与大气PM2.5浓度有明显相关关系，这种相关关系的发生机制十分复杂，表观遗传学(甲基化)的变化可能参与其中[3-4]。叉状头/翅膀状螺旋转录因子(fork head/winged helix transcription factor，FOXP3)是CD+CD25+Treg细胞表面的特异性信号分子，参与调控Treg细胞的形成与功能发挥[5]，而TH1/TH2功能失衡是哮喘发病的重要机制，基于以上理论，课题组质疑FOXP3基因的甲基化可能参与了哮喘的发生以及发展。因此，本研究选取了50只SD大鼠为研究对象，构建哮喘模型并进行不同浓度PM2.5干预，探讨PM2.5暴露对哮喘大鼠气道形态及FOXP3基因DNA启动子区甲基化的影响。

1 材料与方法

1.1 PM2.5采集与处理

采用大流量颗粒采集装备，在早高峰及晚高峰时的繁华路口持续采集24 h。将采样后的滤膜进行切割、浸水后恒温振荡，洗脱后过滤，低温冻存；在真空中进行冷冻干燥处理，当水分完全蒸干时，容器底部可见呈灰白色絮状物的PM2.5颗粒。根据实验设计，采用生理盐水将PM2.5颗粒配置成1、5、25 mg/mL的悬浮液，现配现用。

1.2 实验动物模型建立及分组

50只SPF雄性SD大鼠(4～6周龄)，体质量(203±15)g，购于四川大学实验动物实验中心，动物生产许可证号为SCXK(川)2013-026。根据干预措施及剂量的不同，将大鼠分为(1)对照组：给予与致敏剂同等剂量的生理盐水进行腹腔注射。(2)哮喘组：在实验的第1天，在大鼠大腿内侧皮下注射OVA悬液1 mL(卵清蛋白10 mg、氢氧化铝200 mg)进行致敏，同时腹腔注射百日咳杆菌悬液1 mL作为佐剂，在第8天、第15天各重复一次。……