光姣娜 魏 杰 王 洪 刘甦苏 熊 芮 贾松华 范昌发 岳秉飞

(中国食品药品检定研究院，北京 102600)

肿瘤作为一种极大危害公众健康的疾病，近年来引发越来越多人们的关注。肿瘤的发生发展过程主要包括正常组织细胞发生突变，异常增生，形成血管，肿瘤肿块，肿瘤迁移。由上可见，血管的形成尤为重要。血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factorreceptor，VEGFR-2)，又称激酶功能区受体(KDR)在正常人体中低水平表达，而晚期肿瘤患者体内高水平表达[1]。KDR和血管内皮生长因子(VEGF)相互结合在胚胎血管形成以及血管修复方面有重要作用。有研究发现，KDR的编码基因flk-1呈杂合子类型时不会影响血管的原始循环。同时flk-1产生的KDR在血管形成中是必须的[2-3]。这就使hVEGFR2-KI小鼠被应用在肿瘤研究领域成为可能。

实验小鼠的表现型是遗传物质和外部环境的共同作用结果。血液学参数能够提供小鼠的基本背景信息，其在一定程度上反映了实验动物的状态[4-5]。作为重要的生物学指标，血液学参数也是药物反应监测中必须检测的指标[6-7]。目前还没有hVEGFR2-KI小鼠的生物学数据报道，本研究进行了不同周龄、性别hVEGFR2-KI小鼠的生理生化指标测定，为相关研究应用提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及处理

hVEGFR2-KI小鼠由本单位自主构建，通过将人类KDR基因敲入到C57BL/6小鼠一条染色体上构建而成。

分别取4周龄、8周龄各20只hVEGFR2-KI小鼠雌雄各半，禁食12 h后，取20 μL静脉血测生理指标。全血离心后取上清测生化指标。所有实验操作均按照实验动物福利伦理原则进行。实验动物生产证号SCXK(京)2017-0005。实验动物使用证号SYXK(京)2017-0013。

1.2 主要仪器及设备

日本光电Mek722 2血细胞分析仪，奥林巴斯AU400全自动生化分析仪。

1.3 试剂

测生理指标所用的清洗液DH520、清洗液DH620、稀释液DH640、溶血剂DH910和溶血剂DH680来自上海东湖生物医学有限公司。检测生化指标所用到的试剂来自中生北控生物科技股份有限公司。

1.4 测定项目及方法

根据说明书用日本光电Mek722 2血细胞分析仪测定红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白浓度(HGB)、白细胞计数(WBC)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞绝对值(LYM)、单核细胞绝对值(MON)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、嗜酸性粒细胞绝对值(EOS)、嗜碱性粒细胞绝对值(BAS)、淋巴细胞百分率(LYM%)、单核细胞百分率(MON%)、中性粒细胞百分率(NEUT%)、嗜酸性粒细胞百分率(EOS%)和嗜碱性粒细胞百分率(BAS%)。共计22项指标。

按照说明书用奥林巴斯AU400全自动生化分析仪测定总蛋白(TP)、总胆固醇(CHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、磷(P)和甘油三酯(TG)，共计11项生化指标。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 不同性别的4周龄hVEGFR2-KI小鼠血液生理生化参数的比较

在22项生理学指标以及11项生化指标中，RBC、HCT、MCH、MCHC共4项结果有极显著差异(P<0.01)，HGB、TP、CHO共3项指标差异有统计学意义(P<0.05)，其余各项之间的差异无统计学意义,见表1。

2.2 不同性别的8周龄hVEGFR2-KI小鼠生理生化参数的比较

如表2所示，由不同性别8周龄hVEGFR2-KI小鼠的血液生化指标检测结果可得，共有11项生理生化指标有极显著差异，分别是RBC、HCT、HGB、PLT、PCT、NEUT、MON%和CHO、ALP、GLU、TG；共有5项指标具有显著差异，即LYM%、NEUT%、TP、BUN和P。

2.3 不同年龄的hVEGFR2-KI小鼠之间的生理生化指标的比较

如表3所示，4周龄和8周龄在生理生化指标方面，有RBC、HCT、MCH、HGB、WBC、MCV、RDW、MPV、PDW、LYM、MON%、TP、CHO、ALB、ALP、CREA、GLU、P共18项极显著差异指标；以及PLT、LYM%、NEUT%、ALT、TG共5项具有显著差异指标。

3 讨论

3.1 性别对于hVEGFR2-KI小鼠的影响

在检测到的22项生理学指标以及11项生化指标中，从4周龄和8周龄hVEGFR2-KI小鼠不同性别之间各自比较的结果来看，4周龄小鼠雌雄之间主要是在红细胞以及胆固醇方面有极显著或显著差异，涉及红细胞数、血红蛋白浓度、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白及其浓度、总蛋白和总胆固醇7项，其余各项均无明显差异。因此进行非红细胞或胆固醇方面研究时可考虑减少对于性别差异的关注。

而8周龄小鼠除了红细胞方面在血小板，中性粒细胞，单核细胞，淋巴细胞百分率，碱性磷酸酶，葡萄糖，甘油三脂，尿素各个方面也具有显著差异，综合来看，这可能提示8周龄小鼠雌雄之间的免疫情况有所差异。

表1 不同性别的4周龄hVEGFR2-KI小鼠的血液生理生化参数

表2 不同性别8周龄hVEGFR2-KI小鼠的血液生化指标

表3 不同年龄的hVEGFR2-KI小鼠之间的生理生化指标差异

3.2 年龄对与hVEGFR2-KI小鼠的影响

纵向来看，不同周龄的hVEGFR2-KI小鼠所测得的22项生理指标和11项生化指标中有18项具有极显著差异，5项结果具有显著差异。生理指标中除了平均红细胞血红蛋白浓度以及血小板压积这两项外均有极显著或显著差异；各项免疫细胞的指标中淋巴细胞的绝对值和单核细胞的百分率有显著性差异，淋巴细胞的百分率、中性粒细胞百分率这2项结果差异具有统计学意义。生化指标中差异范围更大，除尿素和天冬氨酸氨基转移酶之外其余各项指标差异均有统计学意义，这其中除了甘油三酯之外都有显著性差异。综合来看，不同年龄的hVEGFR2-KI小鼠之间生理生化上具有明显的差异。在平行实验中宜选取相同年龄段小鼠进行实验。

3.3 hVEGFR2-KI小鼠的选择特性

形成血管是肿瘤的发生发展中必不可少的一部分，已有研究发现机体内的VEGF和KDR相结合，在后期的血管形成和血管修复中有重要作用，并且以KDR为靶点治疗癌症[8-10]。用到KDR基因敲除小鼠自然不可避免，而纯合的KDR敲除小鼠的成活率很低。因此我们检测hVEGFR2-KI小鼠的血液生理生化指标，并分析了年龄和性别对于该品系小鼠的影响。发现4周龄hVEGFR2-KI小鼠雌雄之间差距相对较小，主要集中在红细胞和胆固醇方面。8周龄hVEGFR2-KI雌雄小鼠差异相对明显，在免疫方面也有显著差异。不同周龄小鼠生理生化的很多方面都有极显著或显著差异。本研究所提供hVEGFR2-KI小鼠的生理生化数据，为科研工作者进行实验研究选择动物方面提供一定参考。