基于液氮研磨法的流式细胞术检测马铃薯倍性的研究
2021-01-22郑英转吕燕杨东旭李国威王洪洋李灿辉
郑英转 吕燕 杨东旭 李国威 王洪洋 李灿辉
(1. 云南师范大学云南省马铃薯生物学重点实验室,昆明 650500;2. 云南师范大学云南省高校马铃薯生物学重点实验室,昆明 650500;3. 云南师范大学生命科学学院,昆明 650500;4. 甘肃省礼县三峪乡九年制学校,陇南 742219)
流式细胞术(Flow cytometry,FC)是一种利用流式细胞仪(Flow cytometers)快速多参数分析流体中单个细胞(或其他任何微粒,如细胞核、微生物和染色体制剂等)的技术[1]。目前,流式细胞术广泛应用于免疫学、分子生物学、细菌学、病毒学等领域。在植物学研究中,流式细胞术主要用于检测植物细胞核DNA的含量以及染色体的倍性等方面[2-4]。根据细胞分裂的原理,在分裂过程中生物体中会同时存在含有2n和4n染色体数的细胞核,而染色体数目与DNA含量成正相关,所以测得细胞周期不同阶段的DNA含量,就可以间接反映出所测细胞的染色体倍性水平[5-6]。一般而言,用流式细胞仪检测得到的流式图谱中,其横轴都有2个峰,第一个峰表示含2n个染色体细胞核的荧光强度(即G0/G1期,M3峰),第二个峰表示加倍后的(即4n染色体)细胞核荧光强度(即G2/M期,M4峰);其纵轴则表示检测到的细胞数目。用流式细胞仪检测DNA含量时首先必须要对DNA进行荧光染色,常用的核酸荧光染料有碘化丙啶(Propidium iodide,PI)、异硫氰基荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)等。
马铃薯(Solanum tuberosum)是全球解决粮食短缺和消除贫困的重要作物,分布较为广泛,且染色体倍性丰富。在自然界中有二倍体(2n= 24)、三倍体(2n= 36)、四倍体(2n=48)、五倍体(2n=60)、六倍体(2n= 72)存在。这些不同倍性马铃薯资源具有抗病、抗虫、耐极端环境等优良性状,是马铃薯育种工作中重要的种质资源[7]。……
